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RhoE基因表达改变在糖尿病心肌病心肌纤维化中的作用: 2025年; 目的探讨Ras同源基因家族成员E(RhoE)基因在糖尿病心肌病心肌纤维化中的作用及机制。方法使用野生型SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素溶液(STZ, 70 mg/kg)和等量柠檬酸钠溶液分别作为1型糖尿病(T1DM)组(n=15)和T1DM对照组(n=15)。以db/db自发性2型糖尿病(T2DM)小鼠和野生型C57BL/6J小鼠常规饲养8周分别作为T2DM组(n=5)和T2DM对照组(n=5)。使用RhoE基因全身敲除的杂合子SD大鼠腹腔注射STZ溶液(70 mg/kg)和等量柠檬酸钠溶液分别作为RhoE敲除T1DM组(n=5)和RhoE敲除对照组(n=5)。使用野生型SD大鼠尾静脉注射RhoE过表达的腺相关病毒9和腹腔注射STZ溶液(70 mg/kg)作为RhoE过表达T1DM组(n=5), 以尾静脉注射阴性对照病毒和腹腔注射等量柠檬酸钠溶液的野生型SD大鼠为RhoE过表达对照组(n=5)。成功建模后各组动物继续常规饲养6或8周即为实验终点。于实验终点行心脏超声检测各组动物心功能, 分析各组动物左心室射血分数(LVEF)和舒张早期二尖瓣血流速度峰值与晚期峰值比值(E/A比值)数据, 并采用Masson染色检测各组动物心肌组织中胶原纤维的沉积情况。采用Western blot法检测各组大鼠心肌组织中RhoE基因、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白、Sma和Mad相关蛋白2/3(Smad2/3)和磷酸化Smad2/3蛋白的表达水平, 采用酶联免疫吸附试验法测定各组大鼠血清中转化生长因子-β1(TGF-β1)水平。结果与各自对照组相比, T2DM组小鼠和T1DM组大鼠心脏组织中RhoE基因表达显著下调, 胶原纤维沉积更显著, LVEF和E/A比值均较低(P均<0.05)。与T1DM组比较, RhoE 敲除T1DM组大鼠心肌组织中Smad2/3磷酸化水平、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白水平以及血清中TGF-β1水平均较高(P均<0.05), 胶原纤维沉积更明显(P<0.05)。此外, RhoE 过表达T1DM组大鼠的LVEF和E/A比值较T1DM组高(P均<0.05), 胶原纤维沉积较少(P<0.05)。结论糖尿病通过抑制RhoE基因表达激活TGF-β1/Smads信号通路�; 施凯佳朱星霖赵阳阳柴金萱申志华郭峻莉揭伟; 关键词：糖尿病糖尿病心肌病心肌纤维化

石棉长期暴露致人间皮细胞miRNAs及上皮间充质转化相关基因表达改变: 2024年; 目的探讨温石棉和青石棉长期暴露对人胸膜间皮细胞miRNAs和上皮间充质转化(EMT)相关基因表达的影响。方法于2020年11月,应用荧光定量聚合酶链式反应技术(RT-qPCR)检测人胸膜间皮瘤细胞(NCl-H2052细胞、NCl-H2452细胞)和人正常间皮细胞(Met-5A细胞)中EMT相关基因的表达;从课题组前期miRNA芯片数据中筛选出在人胸膜间皮瘤细胞中异常表达的miRNAs,利用miRWalk数据库(http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de)对差异表达的miRNAs进行靶基因预测,应用RT-qPCR对与EMT相关的异常表达的miRNAs在细胞系中进行验证;分别用5μg/cm 2的温石棉和青石棉对Met-5A细胞进行染毒,每周一次,每次48 h,共处理10次,分别设置为温石棉组,青石棉组,同步设置对照组,加入同等体积的PBS。应用RT-qPCR检测各组细胞EMT相关基因和异常表达miRNAs的表达变化,各组间差异用单因素方差分析进行比较,对照组与各实验组的差异用Dunnet-t检验进行比较。结果与Met-5A细胞比较,NCl-H2052细胞和NCl-H2452细胞的波形蛋白(Vimentin)、细胞转录因子(Twist)基因表达水平升高,钙黏蛋白(E-cadherin)基因表达水平降低(P<0.001);对miRNA芯片结果中异常表达的miRNAs进行靶基因预测,结果显示,与EMT相关的异常表达miRNAs有4个,在细胞系中验证这4个miRNAs的表达,与Met-5A细胞比较,NCl-H2052细胞和NCl-H2452细胞的hsa-miR-155-5p表达水平升高,hsa-miR-34b-5p、hsa-miR-34c-5p和hsa-miR-28-5p表达水平降低(P<0.001),该结果与芯片分析结果一致。对Met-5A细胞进行染毒发现,与对照组比较,青石棉组Vimentin和Twist基因、hsa-miR-155-5p、hsa-miR-34b-5p、hsa-miR-34c-5p的表达水平升高,E-cadherin基因表达水平降低(P<0.05);与对照组比较,温石棉组Vimentin、Twist和E-cadherin基因的表达水平升高,hsa-miR-34b-5p、hsa-miR-34c-5p、hsa-miR-28-5p的表达水平降低(P<0.05)。结论温石棉与青石棉长期暴露均可引起Met-5A细胞产生与间皮瘤细胞; 李芮余温珂王旗朱丽瑾张芳芳; 关键词：间皮瘤青石棉温石棉恶性胸膜间皮瘤 MIRNAS

结直肠癌组织CALM1基因表达改变、EGFR突变情况及其临床意义: 2023年; 目的探讨结直肠癌组织钙调蛋白1(CALM1)基因表达改变和表皮生长因子受体(EGFR)突变情况及其临床意义。方法选择100例结直肠癌患者作为研究对象,均行手术治疗。收集所有患者手术切除癌组织和切缘正常组织标本,检测结直肠癌癌组织和切缘正常组织CALM1基因表达及EGFR突变情况。比较不同临床病理特征患者癌组织CALM1基因表达水平及EGFR突变情况。术后随访3年,观察患者生存情况,运用Kaplan-Meier法对CALM1不同表达水平患者及EGFR突变型与野生型患者进行生存分析。结果结直肠癌组织CALM1基因表达水平及EGFR突变型占比均高于切缘正常组织(t=28.09,χ^(2)=17.36,P均<0.05);有淋巴结转移、Dukes分期C期、低分化程度患者CALM1基因高表达、EGFR突变型比例高于无淋巴结转移、Dukes分期A~B期、高/中分化程度患者(χ^(2)分别=11.79、7.70;7.96、6.18;7.30、8.24,P均<0.05);CALM1基因高表达和EGFR突变型患者3年生存率低于CALM1基因低表达和EGFR野生型患者,差异均有统计学意义(χ^(2)分别=14.85、13.27,P均<0.05)。结论结直肠癌癌组织CALM1基因表达水平及EGFR突变型占比均高于切缘正常组织,二者均与患者临床病理特征和术后生存情况有关。; 张磊邵峰李丽军杜章; 关键词：结直肠癌表皮生长因子受体

镧离子和酸根离子在镧盐诱导HepG2细胞特定基因表达改变中的作用: 2022年; 目的探究镧离子(La^(3+))与酸根离子(SO_(4)^(2-),Cl^(-)和NO_(3)^(-))在镧盐诱导Hep G2细胞特定基因表达改变中的作用。方法分别将含有La_(2)(SO_(4))_(3)0.71 mmol·L^(-1)、La Cl_(3)1.41 mmol·L^(-1)、La(NO_(3))_(3)1.41 mmol·L^(-1)、H_(2)SO_(4)2.12 mmol·L^(-1)、HCl 4.23 mmol·L^(-1)和HNO_(3)4.23 mmol·L^(-1)的培养液在CO_(2)培养箱中进行酸碱平衡1 h,p H值可恢复到7.25,随后分别处理对数生长期Hep G2细胞48 h。采用CCK-8试剂盒检测受试物对细胞存活率的影响。采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测丙氨酰氨基肽酶(ANPEP)、细胞色素P450家族1A1(CYP1A1)、氧化固醇结合蛋白样7(OSBPL7)、CYP3A5、钙电压门控通道辅助亚单位γ4(CACNG4)、双特异性磷酸酶4(DUSP4)、Ras蛋白特异性鸟嘌呤核苷酸释放因子1(RASGRF1)和CYP17A1 m RNA表达水平。结果CCK-8法检测结果显示,与细胞对照组比较,3种镧盐和HCl处理组细胞存活率均降低(P<0.01),而H_(2)SO_(4)和HNO_(3)处理组细胞存活率均未见明显改变。RT-q PCR结果显示,与细胞对照组比较,La_(2)(SO_(4))_(3),LaCl_(3)和La(NO_(3))_(3)均可诱导Hep G2细胞ANPEP,CYP1A1,OSBPL7,CYP3A5,CACNG4,DUSP4,RASGRF1和CYP17A1等8个基因m RNA表达上调(P<0.05);SO_(4)^(2-)诱导ANPEP和CYP1A1表达(P<0.05);Cl^(-)诱导CYP1A1表达(P<0.05);NO_(3)^(-)诱导ANPEP和CYP3A5 m RNA表达,而抑制CYP1A1和CACNG4 m RNA表达(P<0.05)。归因分析发现,La_(2)(SO_(4))_(3)和LaCl_(3)的La^(3+)均能诱导Hep G2细胞上述8个基因m RNA表达上调(P<0.05),但对CYP1A1,CYP3A5,DUSP4和CYP17A1m RNA表达的诱导作用低于La_(2)(SO_(4))_(3)(P<0.05),对CYP3A5和RASGRF1 m RNA表达的诱导作用低于LaCl_(3)(P<0.05);La(NO_(3))_(3)的La^(3+)虽能诱导上述8个基因m RNA表达上调,但ANPEP m RNA的表达上调无统计学意义,且对CYP3A5和CYP17A1 m RNA表达的诱导作用低于La(NO_(3))_(3)(P<0.05)。此外,3种镧盐的La^(3+)对ANPEP,OSBPL7,CYP3A5,CACNG4,DUSP4,RASGRF1和CYP17A1等7个基因m RNA表达的诱导作用彼此�; 邢云昆陈洁周小琰马雪周川付娟玲祁妍敏郝卫东姚碧云赵鹏; 关键词：氯化镧硝酸镧细胞 HEPG2

LNK基因表达改变对THP-1细胞增殖及凋亡的影响被引量：1: 2020年; 目的初步探讨沉默及过表达LNK基因后对人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)增殖及凋亡的影响,为研究白血病靶向治疗提供新方向。方法实验分为4组:沉默LNK组(Si-LNK)、过表达LNK组(VP-LNK)、空转组(Empty virus group)及对照组(Control group)。慢病毒转染THP-1细胞,建立稳定沉默及过表达LNK基因细胞株;转染72 h后,观察沉默LNK组、过表达LNK组及空转组绿色荧光蛋白(GFP)的表达量,流式细胞仪检测慢病毒感染效率;RT-PCR及Western blot检测LNK基因mRNA和蛋白表达水平;CCK-8法检测THP-1细胞在24、48、72 h的增殖情况,流式细胞术检测THP-1细胞凋亡率。结果经慢病毒感染72 h,沉默LNK组、过表达LNK组及空转组THP-1细胞的感染效率在99%以上。与对照组相比,沉默组LNK基因的mRNA水平及蛋白表达水平均显著降低,而过表达组均显著升高,说明LNK基因沉默或过表达成功。CCK-8法及流式检测结果显示沉默LNK组较对照组细胞增殖活性降低,且细胞凋亡率明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组及空转组相比,过表达LNK组THP-1细胞的增殖活性及细胞凋亡率无明显升高或降低,差异无统计学意义(P>0.05)。结论沉默LNK基因可显著抑制THP-1细胞增殖,促进其凋亡,但过表达LNK对细胞增殖及凋亡无明显影响。; 沙梦琪田润梅龙圆圆陈婷婷陈艳; 关键词：过表达增殖凋亡

太赫兹辐射暴露引起小鼠视网膜基因表达改变被引量：3: 2020年; 目的探讨太赫兹(terahertz,THz)辐射暴露后视网膜组织基因表达变化的整体情况,揭示THz暴露所致视觉系统损伤效应的关键信号通路及关键基因。方法通过平均功率密度80 mW/cm^2的THz辐射暴露小鼠眼部,暴露时长2 min,取暴露后视网膜组织,采用RNA-seq测序分析基因表达变化的整体差异,采用聚类分析及富集分析揭示差异基因富集的信号通路和所揭示的生物功能;并进一步通过Real-time PCR揭示THz辐射暴露对视网膜损伤关键基因表达影响的时效关系。结果以P<0.05、|logFC|≥1为筛选条件对差异表达基因进行筛选,共筛选出上调基因625个,下调基因9个。GO分析差异基因主要分布于细胞外成分,分子功能主要为影响蛋白结合等,生物功能主要为细胞应激反应与细胞增殖等。KEGG信号通路分析结果显示,差异基因主要影响PPAR信号通路、癌症相关信号通路、钙离子信号通路及PI3K-Akt信号通路。通过Real-time PCR对视网膜损伤相关基因进行验证发现,在暴露后5 min及24 h,THz辐射暴露均上调Krt12、Cfd、Wnt3a及Adipoq表达,下调Foxe3、Serpine3、Lix1、Rpe65、Rgr及Arsi基因表达,且暴露后5 min上调或下调幅度明显强于24 h。结论THz辐射能够导致视网膜大量基因表达异常,提示THz暴露可能造成视网膜损伤。; 卢永辉陈纯海高鹏马秦龙何旻蒂张蕾余争平; 关键词：太赫兹辐射视网膜 RNA-SEQ 基因表达

职业性铅接触工人相对端粒长度和端粒保护蛋白1结合蛋白1基因表达改变被引量：1: 2020年; 目的探讨职业性铅接触对工人周围血相对端粒长度(RTL)和端粒保护蛋白1结合蛋白1基因(TPP1)mRNA相对表达量的影响。方法采用单纯随机抽样方法,选择某铅蓄电池厂299名铅作业工人为接触组,以无职业性铅接触的68名行政后勤人员为对照组。采集2组人群周围血,采用石墨炉原子吸收光谱法检测血铅水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测RTL和TPP1 mRNA相对表达量。结果与对照组比较,接触组人群血铅水平升高[中位数(M):68.2 vs 266.1μg/L,P<0.01],RTL缩短(M:0.95 vs 0.69,P<0.01),TPP1 mRNA相对表达量降低(M:0.88 vs 0.51,P<0.01)。血铅水平与RTL、TPP1 mRNA相对表达量均呈负相关(Spearman相关系数分别为-0.17、-0.19,P<0.01);RTL与TPP1mRNA相对表达量呈正相关(Spearman相关系数=0.15,P<0.01)。多因素广义线性回归分析结果显示:铅接触者RTL缩短和TPP1 mRNA相对表达量下降的风险升高(P<0.01)。结论铅接触可导致工人周围血RTL缩短,TPP1 mRNA相对表达量降低;RTL缩短的机制可能是铅通过抑制TPP1 mRNA表达干扰端粒修复过程。; 张云霞王团伟孟钰张光辉雷春萍雷春萍夏昭林; 关键词：铅端粒结合蛋白

胃癌患者血清PGⅠ/PGⅡ测定与肿瘤病灶内癌基因表达改变的相关性研究被引量：4: 2019年; 目的研究胃癌患者血清胃蛋白酶原(PG)Ⅰ/PGⅡ测定与肿瘤病灶内癌基因表达改变的相关性。方法回顾性选择2015年10月至2018年2月期间在中山大学附属中山医院接受根治性切除手术的胃癌患者作为研究的胃癌组,另取同期体检的健康志愿者作为对照组。采集血清后测定PGⅠ及PGⅡ的含量,收集胃癌病灶、癌旁组织后测定抑癌基因、原癌基因、侵袭基因的表达量。结果胃癌组患者血清中PGⅠ/PGⅡ的比值均低于对照组(4.63±0.62 vs.10.45±1.86,t=24.907,P<0.05);胃癌病灶中p16、p53、PTEN、KISS1、TSPYL5的mRNA表达量均低于癌旁组织且与血清中PGⅠ/PGⅡ的比值呈正相关(P<0.05),Notch1、LOXL2、Cyclin D1、PCNA、MMP-2、CEACAM-1、Fascin-1、CST-6的mRNA表达量均高于癌旁组织且与血清中PGⅠ/PGⅡ的比值呈负相关(P<0.05)。结论胃癌患者血清中PGⅠ/PGⅡ值的降低与病灶内抑癌基因的低表达、原癌基因及侵袭基因的高表达密切相关。; 方慧云程伟民季明芳李付贵余霞黄汉添; 关键词：抑癌基因原癌基因

Beclin基因表达改变对上皮性卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响及机制探讨被引量：2: 2018年; 目的探讨Beclin基因表达改变对上皮性卵巢癌SKOV3细胞顺铂敏感性的影响,分析其与肿瘤细胞自噬的关系。方法用SKOV3细胞系作为研究载体,通过RT-PCR检测比较SKOV3细胞株与SKOV3顺铂耐药细胞株(SKOV3/DDP)中Beclin基因表达的差异。通过siRNA干扰SKOV3、SKOV3/DDP细胞中Beclin目的基因的表达,采用MTT法比较细胞对顺铂的敏感性。使用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)干预SKOV3/DDP细胞,采用RT-PCR检测Beclin基因的表达,MTT法检测细胞对顺铂的敏感性。结果 SKOV3耐药株Beclin基因表达明显高于SKOV3细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。siRNA干预目的基因Beclin表达后,顺铂对SKOV3、SKOV3/DDP、SKOV3si-Beclin、SKOV3/DDPsi-Beclin的半数抑制浓度(IC50)分别为(12.36±2.31)μg·mL^(-1)、(17.31±1.91)μg·mL^(-1)、(7.57±2.05)μg·mL^(-1)、(12.46±1.58)μg·mL^(-1),与干预前比较,差异有统计学意义(P<0.05)。3-MA可抑制SKOV3/DDP细胞Beclin表达,并增加细胞对顺铂的敏感性,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Beclin基因表达改变与SKOV3细胞对顺铂的敏感性有着密切的关联,且这一关联与自噬现象有关。; 杨飏莫生娣罗嘉侯世敏徐静; 关键词：上皮性卵巢癌顺铂敏感性

HCMV感染诱导血管平滑肌细胞同源盒基因表达改变及TLX2基因的克隆与原核表达被引量：1: 2018年; 目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染对人血管平滑肌细胞同源盒基因(homeobox gene,HOX)表达的影响,并克隆受HCMV诱导表达的同源框基因,为其功能研究奠定基础。方法以1MOI的HCMV感染人血管平滑肌细胞,分别于感染后24h,48h及72h用基因表达谱芯片检测血管平滑肌细胞基因表达水平的改变,筛选差异表达的同源框基因并进行全长cDNA的克隆和原核表达。结果人血管平滑肌细胞感染HCMV后24、48、72h有9个HOX基因的表达发生变化。其中上调基因3个(HHEX、ZEB2、HOXD8),下调基因6个(EMX2OS、SIX5、PKNOX1、IRX3、MEIS1、ESX1)。在HCMV感染后48、72h,TLX2基因表达上调。成功构建pGEX-4T-1/TLX2重组原核表达质粒,转化BL21后经IPTG诱导表达58×103的重组蛋白,该蛋白能被相应抗体识别。结论 HCMV感染可诱导人血管平滑肌细胞多个HOX基因表达的改变,构建的pGEX-4T-1/TLX2重组质粒获得体外表达,为进一步研究TLX2的功能及HCMV致血管平滑肌增生性疾病的分子机制奠定了基础。; 杨长江苏颖慧赵婵玥曹家敏马琼山谭宇蓉邬国军; 关键词：人巨细胞病毒血管平滑肌细胞同源盒基因

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