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- 黄军就文锦坤
- 一种腺相关病毒双重载体基因治疗系统及其在治疗黏多糖贮积症Ⅱ型中的应用
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- 孙文靖吴杰贾学渊于函菲白静傅松滨
- 以脐带间充质干细胞为载体的靶向基因治疗系统联合5-FU对裸鼠HepG2移植瘤的作用被引量:1
- 2017年
- 目的构建以人脐带间充质干细胞(HUMSCs)为载体的靶向基因治疗系统,观察该系统联合低剂量5-FU对裸鼠HepG2移植瘤的治疗作用。方法采用组织块接种法从新鲜无菌新生儿脐带中分离HUMSCs,利用PCR、重叠PCR、酶切、连接等分子生物学技术构建慢病毒表达质粒LentiR.E1A和腺病毒穿梭质粒pAd-hTERTpIL24,并包装慢病毒LentiR.E1A和腺病毒Ad-hTERTp-IL24。采用Transwell实验观察慢病毒和腺病毒共感染对HUMSCs向HepG2细胞趋化的影响。采用皮下接种的方法建立HepG2移植瘤模型,将荷瘤小鼠分成5组各5只,分别给予尾静脉注射PBS、HUMSCs、低剂量5-FU、慢病毒感染HUMSCs联用低剂量5-FU、双病毒共感染HUMSCs联用低剂量5-FU的治疗,比较各组的抑瘤效应。利用BD Annexin-Ⅴ-PE凋亡试剂盒检测腺病毒Ad-hTERTp-IL24与低剂量5-FU联用诱导肝癌细胞凋亡情况。结果成功构建了慢病毒表达载体p LentiR.E1A和腺病毒表达载体pAd-hTERTp-IL24,并成功包装出了慢病毒LentiR.E1A和腺病毒Ad-hTERTp-IL24。Transwell实验显示,慢病毒和腺病毒共感染HUMSCs向肿瘤细胞的迁移能力无明显改变。联合低剂量5-FU治疗裸鼠肝移植瘤中治疗组肿瘤体积较对照组减小(P<0.01)。Ad-hTERTp-IL24与低剂量5-FU联用诱导肿瘤微环境内的肿瘤细胞发生凋亡,其荧光强度明显强于Ad-Track+5-Fu组和5-Fu组。结论成功构建了以HUMSCs为载体的靶向基因治疗系统,由HUMSCS.LentiR.E1A运载携带抑瘤基因的腺病毒Ad-hTERTp-IL24联用低剂量5-FU对裸鼠HepG2移植瘤有明显抑制作用。
- 孔凡妮查剑英杨圆圆卢杨李真真张砚君
- 关键词:脐带间充质干细胞
- 芹菜素对自杀基因治疗系统杀伤人黑色素瘤细胞株A375的增效作用
- 2016年
- 目的研究芹菜素对单纯疱疹病毒1型胸苷激酶/更昔洛韦(HSV1-tk/GCV)自杀基因杀伤人黑色素瘤细胞株A375的增效作用及其机制。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测芹菜素对A375(tk^-)细胞生长的影响,及自杀基因治疗系统联合芹菜素对含20%A375-tk/GFP(tk^+)细胞的tk^+和tk^-混合细胞的杀伤效应的影响,流式细胞仪荧光示踪法分析缝隙连接通讯(GJIC)功能、细胞凋亡变化。结果芹菜素作用A375细胞24,48,72 h的半数抑制量(IC_(50))分别为86.34,25.81,11.16μmol·L^(-1),选用2.5~20μmol·L^(-1)芹菜素进行后续试验;5,10,20μmol·L^(-1)芹菜素联合GCV组对肿瘤细胞的抑制率明显比芹菜素组和GCV组高(P<0.01),协同性分析金正均Q值分别为2.03,1.43和1.36;2.5,5,10μmol·L^(-1)芹菜素处理A375细胞48 h后,各组绿色荧光细胞比值为:0.333±0.003,0.393±0.006,1.105±0.094,芹菜素各组比值均明显高于空白对照组(P<0.01);芹菜素联合GCV各组,与空白对照组、GCV组、芹菜素各组比较,可以增加细胞晚期凋亡率,趋势与MTT结果一致。结论芹菜素可以提高tk^+和tk^-混合细胞对GCV的敏感性,具有协同增强自杀基因系统杀伤效应的作用,其机制可能与芹菜素能够促进A375细胞GJIC功能及诱导细胞凋亡有关。
- 黄暨生张广献谭宇蕙易华罗惠杜标炎
- 关键词:芹菜素黑色素瘤自杀基因缝隙连接通讯
- Tet-On调控HSV1-tk基因治疗系统致MCF-7细胞DNA损伤及凋亡机制研究
- 乳腺癌是严重危害女性健康的一种疾病,已经逐渐成为当今社会一个严峻的卫生问题。目前迫切需要开发新的有效的和毒性低的治疗系统来降低乳腺癌死亡率。肿瘤的自杀基因治疗具有良好应用前景。其中单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因联合GCV的...
- 任自敬
- 关键词:HSV1-TKGCVTET-ON自杀基因治疗
- 婴儿双歧杆菌介导HSV-TK/GCV自杀基因治疗系统治疗裸鼠肾癌的实验研究
- 目的: 评价婴儿双歧杆菌介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)/丙氧鸟苷(GCV)自杀基因治疗系统对裸鼠肾癌的疗效,初步探讨其诱导肾癌组织细胞凋亡及对肾癌组织p-Stat3、Bcl-xL及Bax表达的影响。 方法:...
- 任劲
- 关键词:肾癌婴儿双歧杆菌单纯疱疹病毒胸苷激酶丙氧鸟苷
- 肝癌HSV-tk/GCV自杀基因治疗系统的增效策略
- 2014年
- HSV-tk/GCV系统在临床当中的应用日趋完善,不仅应用范围越来越广泛,同时也逐渐成为了提高治疗效率的重要措施之一。但是伴随着临床应用资料的不断增加,HSV-tk/GCV系统也表现出一定程度上的缺陷,因此需要通过其他领域的共同研究对临床治疗方案进行改进与补充,将治疗效率进行强化与提高。目前的增效策略当中包括了亲和性的强化、表达水平的提高、免疫系统的协作、双自杀基因的联合使用、细胞周期的全面激活、各类肿瘤的治疗方案融合等内容。本次研究将针对HSV-tk/GCV自杀基因治疗系统在肝癌当中的增效策略进行多重分析,同时对其未来的发展提出可行性建议。
- 李曦欧
- 关键词:自杀基因肝癌基因治疗
- TeT-On调控HSV1-tk基因治疗系统致MCF-7细胞DNA损伤及调亡机制研究
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- 任自敬
- 关键词:MCF-7细胞
- 婴儿双歧杆菌介导HSV-TK/GCV自杀基因治疗系统对裸鼠肾细胞癌肿瘤细胞凋亡及NF-κB活性的影响
- 2014年
- 目的:证实婴儿双歧杆菌(bifidobacterium infantis,BI)介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)/丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)自杀基因系统对裸鼠肾癌的治疗作用,检测其诱导裸鼠肾癌组织细胞凋亡的作用及对核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路的影响。方法:引瘤后原代细胞培养注射细胞悬液法建立裸鼠皮下荷瘤肾癌模型,并随机分为BI-pGEX-TK/GCV组(重组质粒组)、BI-pGEX-5X-1/GCV组(空质粒组)、BI/GCV组(空BI组)和生理盐水/GCV对照组(生理盐水组)。分别经尾静脉注射BI-pGEX-TK、BI-pGEX-5X-1、BI和生理盐水,联合腹腔注射GCV,4周后,称取裸鼠质量及肿瘤质量。TUNEL法检测各组肿瘤细胞凋亡情况,qRT-PCR、Western blot检测各组肿瘤组织Rel A、Caspase-3mRNA及蛋白表达水平。结果:(1)重组质粒组荷瘤裸鼠体质量明显高于其余3组(P=0.006),肿瘤组织质量明显降低(P=0.003)。(2)TUNEL法检测发现各组均有不同程度的肿瘤细胞凋亡,以重组质粒组最为明显(P=0.000)。(3)与空质粒组、空BI组及生理盐水组比较,重组质粒组Rel A蛋白表达明显下调(P=0.000),Caspase-3蛋白表达明显上调(P=0.000)。结论:BI介导HSV-TK/GCV自杀基因系统对荷瘤裸鼠肾癌有明显的抑制作用,可能通过影响NF-κB信号通路的活性,诱导荷瘤裸鼠肾癌肿瘤细胞的凋亡,发挥抑癌作用。
- 肖啸任劲杨柒唐伟
- 关键词:婴儿双歧杆菌肾细胞癌核因子-ΚB
- 婴儿双歧杆菌/重组人核心蛋白聚糖肿瘤靶向性基因治疗系统的构建被引量:3
- 2012年
- 目的构建双歧杆菌表达重组人核心蛋白聚糖(rhDCN)基因载体。方法利用pGEX-4T-1原核载体系统,用EcoRΙ和NotΙ酶对PCR扩增后DCN基因和PGEX-4T-1质粒分别进行双酶切,琼脂糖电泳凝胶分离并用凝胶重回收试剂盒回收酶切的1.1kbp和5.0kbp两个目的片段。T4 DNA连接酶连接,构建成PGEX-4T-1-DCN重组质粒。电穿孔法将重组质粒转化婴儿双歧杆菌,挑选阳性克隆菌落,提取质粒,双酶切鉴定及测序验证分析。结论成功构建婴儿双歧杆菌/rhDCN肿瘤靶向性基因治疗系统。
- 耿飞王桂琴李泳慧
- 关键词:婴儿双歧杆菌基因治疗
相关作者
- 陈治国

- 作品数:8被引量:1H指数:1
- 供职机构:北京大学
- 研究主题:HSV-TK/GCV Γ射线 基因治疗系统 抗肿瘤 动物实验研究
- 沈磊

- 作品数:21被引量:32H指数:3
- 供职机构:北京大学
- 研究主题:Γ射线 HSV-TK/GCV 基因治疗系统 像素 场效应晶体管
- 周梅

- 作品数:19被引量:19H指数:3
- 供职机构:北京大学基础医学院
- 研究主题:Γ射线 双歧杆菌 HSV-TK/GCV 基因治疗系统 动物实验研究
- 占晓海

- 作品数:7被引量:2H指数:1
- 供职机构:北京大学基础医学院
- 研究主题:HSV-TK/GCV Γ射线 基因治疗系统 动物实验研究 促性腺激素
- 杨业鹏

- 作品数:51被引量:176H指数:7
- 供职机构:北京大学医学部基础医学院
- 研究主题:Γ射线 苯并(A)芘 电离辐射 细胞凋亡 血淋巴细胞