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一种α1,3/4-岩藻糖基转移酶的叠加突变体及其生产二岩藻糖基乳糖的方法: 本发明公开了一种α1,3/4‑岩藻糖基转移酶突变体及其生物合成二岩藻糖基乳糖的方法，属于生物工程技术领域。本发明将来源于幽门螺杆菌UA948的α1,3/4‑岩藻糖基转移酶基因HP3/4FT分为区域1，2和3，在区域内选择...; 沐万孟朱莺莺陈柔霖张文立

P197E与ep8叠加突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的影响被引量：5: 2010年; 为提高脂肪酶的热稳定性,作者利用重叠延伸PCR对扩展青霉脂肪酶(PEL)基因进行了体外定点突变,构建了P197E(即将第197位的脯氨酸突变为谷氨酸)与随机突变体ep8叠加突变的重组质粒pPIC3.5K-ep8-P197E。将该质粒电转化至毕赤酵母Pichiapastoris GS115中,进行异源表达。与野生型酶和单点突变酶PEL-ep8的酶学性质比较,结果表明:叠加突变体PEL-ep8-P197E在40°C温育处理30min后,残余酶活分别比野生型PEL和随机突变体PEL-ep8提高了42.13%和37.3%。叠加突变体PEL-ep8-P197E的Tm值为41.51°C,比野生型酶PEL提高了2.81°C,比随机突变体脂肪酶PEL-ep8提高了2.25°C。通过对脂肪酶PEL的叠加突变,提高了该酶的热稳定性,并为结构与功能的进一步研究提供了材料。; 刘燕雅黄平司圣乾陈彦林琳; 关键词：扩展青霉脂肪酶叠加突变热稳定性

扩展青霉脂肪酶K56R叠加突变对热稳定性的影响被引量：4: 2009年; 目的:扩展青霉脂肪酶随机突变体ep8是一株热稳定性比野生型有所提高的突变体。获得热稳定性提高的优良菌株。方法:在ep8的基础上利用重叠延伸PCR构建叠加突变重组质粒pPIC3.5K-ep8-K56R,将该质粒电转毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115进行异源表达。结果:该叠加突变脂肪酶在毕赤酵母中获得了活性表达。15%SDS-PAGE结果分析表明突变脂肪酶PEL-ep8-K56R-GS分子量与野生型PEL-GS一致,约为28kDa。叠加突变脂肪酶在37℃时酶活为852U/mL、野生型为760u/mL、随机突变体为824u/mL,叠加突变体酶活相比野生型提高了21.1%,相比随机突变体提高了3.4%。热稳定性分析数据表明叠加突变脂肪酶Tm值为40.1℃、野生型为38.7℃、随机突变体为39.9℃,Tm值相比野生型提高了1.4℃,相比随机突变体提高了0.2℃。; 沈麟施文芳胡长浩林琳; 关键词：扩展青霉脂肪酶叠加突变热稳定性

叠加突变改善扩展青霉脂肪酶的热稳定性: 本研究利用单点突变和叠加突变技术手段，对扩展青霉脂肪酶(PEL)进行热稳定性的蛋白质工程改造。ep8是由本课题组获得的含有一个突变点的随机突变热稳定性脂肪酶，在利用PCR介导的分子克隆技术构建pSK-ep8 模板后，采用...; 蔡少丽; 关键词：叠加突变热稳定性分子克隆

扩展青霉脂肪酶ep8与R182K叠加突变体的构建被引量：3: 2007年; 利用重叠延伸PCR法对扩展青霉碱性脂肪酶(PEL)基因进行体外定点突变,并将含突变基因的重组质粒pAO815-ep8-R182K在毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115中进行表达。叠加突变体PEL-ep8-R182K表达产物与野生型PEL、PEL-ep8比较实验表明:叠加突变体表达蛋白PEL-ep8-R182K最适反应温度与野生型PEL、PEL-ep8一致,均为40℃;热稳定性与野生型相似,比PEL-ep8降低2.25℃。但是,在比活上,PEL-ep8-R182K与PEL-ep8、野生型PEL相比,其比酶活分别提高了14.03%和3.86%。; 王彩梅蔡少丽吴义真林琳; 关键词：扩展青霉脂肪酶叠加突变最适温度热稳定性

K55R与ep8叠加突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的改善被引量：9: 2007年; 利用重叠延伸PCR对扩展青霉脂肪酶(PEL)基因进行体外定点突变,构建了K55R与随机突变体ep8叠加突变的重组质粒pAO815-ep8-K55R。将该质粒电转化引入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,进行异源表达。实验结果表明:该叠加突变体在毕赤酵母中获得了活性表达,得到表达产物脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS。其表达量为508u/mL,分别约为野生型脂肪酶PEL-GS(627u/mL)的81%,随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS(924u/mL)的55%;其比活力为2309.1u/mg,与随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS和野生型脂肪酶PEL-GS的相仿。叠加突变脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS的最适作用温度为37℃,与野生型脂肪酶PEL-GS和随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS一致;其Tm值为41.0℃,比野生型脂肪酶PEL-GS提高了2.3℃,比随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS提高了0.8℃。表明叠加突变脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS的热稳定性有了进一步的提高。; 蔡少丽林俊涵王彩梅林琳; 关键词：扩展青霉脂肪酶叠加突变热稳定性

K55R与ep8叠加突变对扩展青霉碱性脂肪酶热稳定性的改善: 利用重叠延伸PCR法对扩展青霉碱性脂肪酶(PEL)基因进行体外定点突变,构建了K55R与随机诱变体ep8叠加突变的重组质粒pAO815-ep8-K55R。将该质粒电转化毕赤酵母GS115进行表达。结果表明:该叠加突变体在...; 蔡少丽王彩梅邹有土黄平林琳; 关键词：扩展青霉碱性脂肪酶叠加突变热稳定性

嗜热糖苷酶的改造及GOS3对LS174T细胞的活性: 功能性低聚半乳糖（Galacto-Oligosaccharides,GOS）是一种益生元,不能被人体利用,不会在小肠被消化,从而能够顺利到达结肠,被结肠中的微生物发酵,刺激结肠内有益菌群生长。GOS也通过影响肠道上皮杯状...; 衣丽; 关键词：Β-葡萄糖苷酶叠加突变

理性设计盐桥构建伯克霍尔德菌脂肪酶热稳定突变体: 伯克霍尔德菌(Burkholderia sp.)ZYB002脂肪酶A欠佳的温度耐受性限制其使用效果和应用范围。提高酶蛋白的稳定性,对延长酶蛋白的货架半衰期,提高酶反应速率等具有重要的意义。本文借助FoldX、Rosett...; 赵丙春; 关键词：叠加突变

分子突变改善扩展青霉脂肪酶的耐热性: 扩展青霉脂肪酶（PEL）可在油水界面催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油，是工业生产上一种重要的水解酶。本研究利用叠加突变技术手段，对扩展青霉脂肪酶（Penicillium expansum lipase，PEL）进行热稳定...; 沈麟; 关键词：扩展青霉脂肪酶叠加突变热稳定性

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