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- 人脂肪间充质干细胞外泌体对去势小鼠骨质疏松的预防
- 2025年
- 目的:研究人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hASCs)外泌体对骨质疏松小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的影响,以及对雌激素缺乏引起的骨质疏松的预防效果。方法:采用超速离心法提取hASCs分泌的外泌体,然后提取骨质疏松小鼠BMSCs,并将这些细胞暴露于含有hASCs外泌体的成骨诱导培养基中作为实验组,同时使用不含hASCs外泌体的成骨诱导培养基对BMSCs进行成骨诱导作为对照组,通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色和定量分析以及实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qPCR)检测评估hASCs外泌体对BMSCs成骨分化的影响。将标记有荧光信号的hASCs外泌体通过尾静脉注射入小鼠体内,观察外泌体的体内分布情况。切除小鼠双侧卵巢构建小鼠雌激素缺乏模型,术后两周将小鼠分为3组:实验组为雌激素缺乏小鼠接受hASCs外泌体注射;阴性对照组为雌激素缺乏小鼠接受磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffered saline,PBS)注射;阳性对照组为假手术(Sham)小鼠接受PBS注射,每3天注射1次,共注射8次后收集小鼠股骨,拍摄显微CT(micro computed tomography,micro-CT),计算骨密度并进行骨形态学分析。结果:使用超速离心法成功提取hASCs外泌体。hASCs外泌体使骨质疏松小鼠BMSCs的ALP染色加深,ALP活性增强,成骨相关基因表达上调。注射hASCs外泌体的雌激素缺乏小鼠较注射PBS的雌激素缺乏小鼠股骨骨小梁更为致密,骨密度增大,并且与Sham组相比并未出现明显的骨密度降低。结论:hASCs外泌体不仅能在体外促进骨质疏松小鼠BMSCs的成骨分化,还能在体内有效预防去势小鼠骨质疏松的发生,这些发现为hASCs外泌体作为一种新型的生物治疗手段在骨质疏松症的预防中的应用提供了科学依据。
- 盛春辉张晓吕珑薇周永胜
- 关键词:间充质干细胞成骨分化外泌体骨质疏松
- 养阴宁神方对去势小鼠海马神经元突触的可塑性调节被引量:1
- 2024年
- 目的观察养阴宁神方对雌性小鼠去势后认知功能的影响。方法将60只C57BL/6J雌性小鼠随机分为假手术组,模型组,雌激素组,低、中、高剂量组,每组10只。假手术组仅切开皮肤和腹膜,不摘除小鼠的卵巢;其余各组均进行双侧卵巢切除术。假手术组、模型组均给予等容量的生理盐水(0.1 mL/10 g),雌激素[雌二醇(estradiol,E2),0.09 mg/kg]组及低剂量组(9.459 g/kg)、中剂量组(18.459 g/kg)、高剂量组(36.99 g/kg)灌胃药液,均灌胃3周。记录小鼠术后伤口愈合时间,去势前、去势1周、去势4周进行水迷宫潜伏实验和穿梭实验测试小鼠的学习记忆功能。采用ELISA法测定血清E2含量;HE染色观察小鼠海马神经元的形态;尼氏染色观察海马神经尼氏染色阳性细胞的数量;共聚焦显微镜下观察小鼠海马神经元细胞超微结构情况。结果与假手术组相比,模型组伤口愈合时间延长(P<0.05);与模型组、雌激素组及低、高剂量组比较,中剂量组伤口愈合时间缩短(P<0.05)。去势1周,与假手术组比较,模型组、雌激素组及低、中、高剂量组逃避潜伏期延长、穿梭次数减少(P<0.05)。去势4周,与假手术组比较,模型组逃避潜伏期延长、穿梭次数减少(P<0.05);与模型组相比,雌激素组及低、中、高剂量组逃避潜伏期缩短、穿梭次数增加(P<0.05)。去势4周,与假手术组比较,模型组E2浓度明显降低(P<0.01);与模型组比较,雌激素组及低、中、高剂量组E2浓度明显增高(P<0.01)。尼氏染色显示,与假手术组比较,模型组尼氏阳性细胞数减少(P<0.01);与模型组比较,雌激素组及低、中、高剂量组尼氏阳性细胞数增加(P<0.01)。HE染色显示,假手术组,雌激素组,低、中、高剂量组锥体神经元增多,且突起明显;模型组锥体神经元较少、颗粒细胞较多。共聚焦显微镜下见,假手术组,雌激素组,低、中、高剂量组海马神经元囊泡和突触粗面内质网结构增多;�
- 雷华娟田丰铭易健易健李梓欧戴金城郭芬乐李乐刘柏炎
- 关键词:去势雌激素海马神经元突触可塑性
- 桃红四物汤上调Nrf2/HO-1信号通路减轻去势小鼠心肌缺血再灌注损伤被引量:4
- 2024年
- 目的:探讨桃红四物汤对去势(OVX)雌性小鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的影响及机制研究。方法:雌性小鼠建立去势模型后,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠的雌二醇(E2)水平验证去势模型;对成功建立去势模型的小鼠抽取60只随机分为6组:假手术组、模型组、桃红四物汤低、中、高剂量组(9、18、36 g·kg^(-1))、核因子E2相关因子2(Nrf2)抑制剂组,每组10只;采用激光散斑血流仪验证MIRI模型;采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法与苏木素-伊红(HE)染色法检测心肌组织病理变化;ELISA检测小鼠血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白Ⅰ(CTnⅠ)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)水平;采用免疫荧光染色法观察Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)的表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Nrf2、HO-1与凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、炎症因子白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-1β(IL-1β)的表达。结果:与假手术组比较,模型组小鼠血清中CK-MB、CTnⅠ、MDA、IL-6水平升高(P<0.01),SOD、IL-10水平降低(P<0.01),心肌组织TTC染色、HE染色损伤评分增加(P<0.01),心肌组织免疫荧光Nrf2、HO-1的表达减少(P<0.01),心肌组织Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白表达量减少,Bax、IL-18、IL-1β蛋白表达量增加(P<0.01);与模型组比较,桃红四物汤剂量组小鼠血清中CK-MB、CTnⅠ、MDA、IL-6明显下降(P<0.05,P<0.01),SOD、IL-10明显增加(P<0.05,P<0.01),心肌组织的TTC染色、HE染色损伤评分显著降低(P<0.01),心肌组织免疫荧光Nrf2、HO-1的表达增加(P<0.01),心肌组织Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白表达量明显增加(P<0.05,P<0.01),Bax、IL-18、IL-1β蛋白表达量明显减少(P<0.05,P<0.01),其中以桃红四物汤高剂量组效果最为显著;Nrf2抑制剂组小鼠血清中CK-MB、CTnⅠ、MDA、IL-6水平明显升高(P<0.05,P<0.01),SOD、IL-10水平明显降低(P<0.05,P<
- 杨钰铭祝莹刘常昳程婧何非
- 关键词:桃红四物汤心肌缺血再灌注损伤去势
- 脊椎蛋白2对BMSCs成骨分化及卵巢去势小鼠骨代谢的作用研究
- 2024年
- 目的探讨脊椎蛋白2(R-spondin 2,Rspo2)对BMSCs成骨分化及卵巢去势(ovariectomy,OVX)小鼠骨密度和骨矿含量的影响。方法取7只4周龄雌性C57BL/6小鼠长骨骨髓,采用全骨髓培养法分离培养BMSCs并传代,经流式细胞仪鉴定细胞表型后,取第3代细胞与10、20、40、80和100 nmol/L Rspo2共培养,采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测细胞增殖,评价Rspo2对BMSCs活性影响并筛选不影响细胞活性的Rspo2干预浓度;与不同筛选浓度Rspo2培养后更换为成骨诱导培养基诱导培养,行ALP及实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)检测RUNX家族转录因子2(RUNX family transcription factor 2,Runx2)、Ⅰ型胶原(collagen typeⅠalpha 1,Col1)、骨钙素(osteocalcin,OCN)基因表达,评价Rspo2对BMSCs成骨能力的影响;以上检测均以正常培养BMSCs作为对照。另取18只10周龄雌性C57BL/6小鼠,随机分为假手术组、OVX组和OVX+Rspo2组,每组6只。假手术组仅行双侧背部切开缝合,其余两组通过双侧OVX建立骨质疏松模型;术后OVX+Rspo2组每周腹腔注射Rspo2(1 mg/kg),其余两组接受相同剂量生理盐水。干预12周后,3组称重小鼠体质量及子宫质量,评估OVX模型制备是否成功;取胫骨行HE染色观察骨量变化、免疫组织化学染色观察骨组织中Runx2蛋白表达水平;ELISA法检测血清中骨代谢标记物[ALP、OCN、Ⅰ型前胶原氨基端肽(typeⅠprocollagen amino-terminal peptide,PINP)]和骨吸收标记物[β胶原降解产物(β-isomerized C-telopeptide,β-CTX)]表达水平;Micro-CT检测胫骨微结构变化,并对骨小梁厚度(trabeculae thickness,Tb.Th)、骨小梁数量(trabeculae number,Tb.N)、骨小梁分离度(trabeculae separation,Tb.Sp)和骨体积分数(bone volume fraction,BV/TV)进行三维组织形态计量分析。结果CCK-8检测示80 nmol/L以下浓度的Rspo2不会产生细胞毒性(P>0.05),且20 nmol/L Rspo2组细胞活力明显高于对照组(P<0.05)。基于上述结果,�
- 柳鑫石博文蔡成阔王昊天贾鹏
- 关键词:BMSCS骨形成小鼠
- 胶原蛋白水解物缓解去势小鼠骨质疏松作用机理的探究
- 2024年
- 胶原蛋白水解物被认为拥有促进成骨和成血管以及起到防止骨质疏松的作用。我们通过生物信息学和建立去势小鼠骨质疏松症模型探究了胶原水解物(CH)对骨质疏松症有益作用的潜在机制。本研究发现,CH可以使24个与骨质疏松和成血管相关基因差异表达,差异基因的富集分析确定了20个KEGG通路。通过对筛选的十个通路进行分析,并结合STITCH数据库的探究,发现了Kdr、Erbb2、Wnt3a、Jagl、Fltl为CH调控的中枢基因。特别是,MAPK信号通路被确定为共享通路中的潜在关键通路。这个研究结果表明,胶原蛋白水解物可以通过MAPK信号通路促进成血管并抑制骨质疏松。
- 杜博玮李承明
- 关键词:胶原水解物骨质疏松差异基因信号通路
- 植物雌激素鹰嘴豆芽素A(BCA)对肝纤维化去势小鼠模型的改善作用及机制被引量:1
- 2024年
- 目的探究植物雌激素鹰嘴豆芽素A(BCA)对CCl4诱导的雌性双侧卵巢切除(去势)小鼠肝纤维化的影响及其机制。方法取50只去势雌性昆明小鼠,腹腔注射CCl4建立肝纤维化模型,将建模小鼠按体质量随机分成模型组、阳性对照组、BCA低、中、高剂量组各10只,同时选取10只同批雌性小鼠切除双侧卵巢旁少量脂肪组织作为假手术组。假手术组和模型组灌胃等体积的0.5%羧甲基纤维素钠溶液,阳性对照组用雌二醇2 mg/kg灌胃,BCA低、中、高剂量组分别按25、50、100 mg/kg BCA灌胃,1次/d,连续7周。给药结束后麻醉处死小鼠取材,测定肝指数和子宫指数,HE及Masson染色观察肝组织病理改变,生化法检测AST、ALT活性,ELISA法检测肝组织中IL-6、TNF-α水平,Western Blot法测定肝组织中Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、雌激素受体β(ERβ)、p-NF-κBp65/NF-κBp65蛋白的相对表达量。计量资料两组间比较采用成组t检验,多组间比较采用单因素方差分析;进一步两两比较采用LSD-t检验。非正态分布的计量资料多组间比较及进一步两两比较均采用Kruskal-Wallis H检验。结果与假手术组相比,模型组肝指数升高,子宫指数降低,血清AST和ALT活性、肝组织中IL-6、TNF-α水平及CollagenⅠ、TGF-β1、α-SMA、p-NF-κBp65/NF-κBp65蛋白表达均升高(P值均<0.05),肝组织ERβ表达变化不明显(P>0.05),模型组肝组织明显纤维化病变,出现肝细胞水肿、脂肪样变、坏死并伴有炎细胞浸润,胶原纤维增生沉积、交错分布。与模型组比较,BCA各剂量组肝指数降低,血清ALT和AST活性、肝组织IL-6、TNF-α水平及CollagenⅠ、TGF-β1、α-SMA、p-NF-κBp65/NF-κBp65的蛋白表达均降低(P值均<0.05),子宫指数无明显变化(P>0.05),肝组织ERβ蛋白表达升高(P<0.05),肝组织的纤维化病变有不同程度改善。结论BCA可有效改善CCl4诱导的雌性去势小
- 谭超容李小飘冉俊艳熊英廖尚高张金娟张金娟
- 关键词:肝纤维化植物雌激素类卵巢切除术
- 褪黑素对去势小鼠椎体生物力学性能影响的研究
- 2023年
- 目的从生物力学的角度,观察褪黑素对去势小鼠椎体生物力学性能的影响。方法选取48只9周龄的雌性C57BL/6J小鼠,在无特定病原体(SPF)动物房适应性喂养3周至12周龄,到达性成熟后使用随机数字表法分为假手术组(Sham组,12只)和去卵巢组(36只);去卵巢组小鼠采取背侧切口行双侧卵巢切除术,而Sham组小鼠行双侧卵巢周围少量脂肪组织切除术。术后1周,将去卵巢组小鼠随机分为模型组(Control组)、己烯雌酚组(DES组)和褪黑素组(Melatonin组),每组12只。Melatonin组小鼠以褪黑素溶液灌胃,DES组小鼠以己烯雌酚溶液灌胃,Control组小鼠以等体积的2%乙醇溶液灌胃,Sham组以等体积的蒸馏水灌胃。所有小鼠经过不同方式干预后,分别于第4、8、12周末应用CO_(2)气体窒息方法,每组小鼠随机处死3只,完整取出各组小鼠的L3椎体,置于Instron万能材料试验机上进行生物力学测试。分析各组小鼠L3椎体最大压力负荷的变化,比较第4、8、12周末时各组小鼠L3椎体的最大压力负荷。结果各组小鼠L3椎体最大压力负荷随时间的变化均呈现下降的趋势,其中Sham组和DES组最大压力负荷高于Control组和Melatonin组,且曲线变化幅度稍小;Melatonin组最大压力负荷高于Control组。第4周末时,Melatonin组平均最大压力负荷为31.67 N,小于Sham组的35.67 N和DES组的36.67 N,但显著高于Control组的27.00 N,差异具有统计学意义(P<0.05)。第8周末时,Melatonin组平均最大压力负荷为28.00 N,小于Sham组的32.67 N和DES组的33.33 N,但显著高于Control组的23.33 N,差异具有统计学意义(P<0.05)。第12周末时,Melatonin组平均最大压力负荷为23.33 N,小于Sham组的29.00 N和DES组的29.33 N,但显著高于Control组的18.67 N,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论褪黑素应用于去势的雌性C57BL/6J小鼠中,能够较为明显提高其L3椎体的最大压力负荷,从而起到减缓骨质疏松进程的作用。
- 周永富徐海英
- 关键词:褪黑素骨质疏松生物力学去势小鼠
- 雷公藤甲素对去势小鼠骨质疏松模型破骨细胞分化的影响被引量:2
- 2023年
- 目的 探究雷公藤甲素(TP)对去势小鼠骨质疏松模型破骨细胞分化的影响,并探讨其可能的分子机制。方法 建立去势小鼠骨质疏松模型,分为假手术组(Sham组)、卵巢切除去势组(OVX组)、雷公藤甲素组(TP组)、利维爱组(Livial组),造模后第3天给予对应药物处理。治疗6周后,采用TRAP染色检测左侧股骨干骺端的破骨细胞数量。Micro-CT重建三维骨结构图像,检测左侧胫骨干骺端的骨密度(BMD)、骨小梁数目(Tb.N)、骨体积分数(BV/TV)、骨表面积组织体积比(BS/TV)、骨小梁分离度(Tb.Sp),ELISA检测外周血中IL-6、TNF-α、骨形成标志物骨钙素(OC)、骨吸收标志物抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAcp5b)含量。Western Blot检测右侧股骨组织中p65、p-p65、IκBα、p-IκBα蛋白表达水平。结果 骨小梁周围破骨细胞数量比较:OVX组与Sham组相比明显增加;TP组与OVX组相比明显减少;TP组与Livial组比较,差异无统计学意义。骨参数分析:OVX组与Sham组相比,小鼠骨组织的BMD、Tb.N、BV/TV、BS/TV均显著下降,而Tb.Sp显著升高(P<0.01);与OVX组相比,TP组和Livial组骨组织的BMD、Tb.N、BV/TV、BS/TV均显著升高,而Tb.Sp显著下降(P<0.01);TP组与Livial组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。IL-6、TNF-α、OC、TRAcp5b含量比较:OVX组的IL-6、TNF-α含量显著高于Sham组(P<0.01);各组间OC水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);OVX组的TRAcp5b水平显著高于Sham组(P<0.01)。蛋白表达水平:与Sham组相比,OVX组的p65、IκBα表达水平不变,而p-p65和p-IκBα表达水平显著升高(P<0.01);TP处理后,p65、IκBα表达水平不变,而p-p65和p-IκBα表达水平却显著降低(P<0.01);TP组与Livial组比较,两者间p65、IκBα、p-p65和p-IκBα表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TP抑制破骨细胞分化,改善了去势小鼠的骨量丢失,其分子机制可能与抑制炎症因子IL-6、TNF-α的表达及NF-κB信号通路的磷酸化水平有关。
- 胡昊余田甜丰瑞兵李朝文吴刚黄勇
- 关键词:雷公藤甲素破骨细胞
- 骨碎补总黄酮对去势小鼠海马神经元细胞的抗凋亡作用
- 2023年
- 目的:研究骨碎补总黄酮(Drynaria fortunei,DF)对卵巢摘除所致认知功能障碍小鼠海马神经元的保护作用。方法:本研究将90只昆明小鼠随机平均分为空白组、模型组、假手术组(SHAM组)、雌二醇阳性药(E2)组、DF组、DF+ICI182780(阻断剂)组,每组15只。采用新物体识别实验检测小鼠的记忆能力;应用HE染色、透射电镜观察小鼠海马区的细胞形态;通过TUNEL法测定小鼠的神经元细胞凋亡比。结果:与空白组相比较,模型组小鼠的识别指数明显下降,海马区神经元细胞数量降低,神经元细胞凋亡比明显增大;与模型组相比较,SHAM组、E2组及DF组小鼠的识别指数均上升,但后者在统计学中具有更为显著的意义,且SHAM组、E2组和DF组小鼠神经元细胞数量较多、细胞结构清晰可见,神经元细胞凋亡比明显降低;与DF组相比较,DF+ICI182780组细胞凋亡比明显升高,神经元细胞数量明显下降。结论:DF可以改善去势雌性小鼠的认知功能障碍,抑制海马神经元细胞凋亡,这可能是通过介导雌激素受体(Estrogen receptor,ER)实现的。
- 雷霞苏婷于浩崔悦张宁王丽红
- 关键词:认知功能障碍卵巢摘除骨碎补总黄酮凋亡
- 基于Micro-CT解析抗疏强骨方对去势小鼠骨微结构影响被引量:4
- 2023年
- 目的运用Micro-CT断层扫描及三维重建技术探讨抗疏强骨方对去势雌性小鼠骨微结构的影响。方法清洁级6周龄KM雌性小鼠60只,根据分层随机法分为假手术组、模型组、阿仑膦酸钠组、抗疏强骨方组,除假手术组外,其余3组小鼠均手术切除双侧卵巢。术后1周开始灌胃给药,抗疏强骨方组和阿仑磷酸钠组除了分别每天23.53 g/kg抗疏强骨方和1.3 mg/kg阿仑膦酸钠灌胃,其他饲养方法与假手术组和模型组相同,连续治疗12周后处死取材。运用显微计算机断层扫描技术检测各组骨微结构;ELISA检测血清中骨特异性碱性磷酸酶(B-ALP)、骨钙素(BGP)、抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)含量。结果与假手术组比较,模型组小鼠骨小梁骨密度(Tb.BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)降低(P<0.05),骨小梁分离度(Tb.Sp)、结构模型指数(SMI)增加(P<0.05);与模型组相比较,阿仑膦酸钠组与抗疏强骨方组中Tb.BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th升高(P<0.05),Tb.Sp、SMI降低(P<0.05);从三维重建图看,模型组较假手术组股骨Ward三角区骨小梁数量稀疏、间隙变大;与模型组相比,阿仑膦酸钠组与抗疏强骨方组股骨近端股骨头内骨小梁相对完整;与假手术组比,模型组血清中B-ALP、BGP、TRACP-5b均升高(P<0.05);与模型组比,阿仑膦酸钠组与抗疏强骨方组血清中B-ALP、BGP、TRACP-5b降低(P<0.05)。结论抗疏强骨方可以减少去势小鼠骨量丢失,改善骨微结构,从而达到预防绝经后骨质疏松作用。
- 钟于科董博袁普卫王占魁康武林刘德玉马阿妮姚洁
- 关键词:绝经后骨质疏松骨微结构MICRO-CT
相关作者
- 徐又佳

- 作品数:760被引量:3,173H指数:25
- 供职机构:苏州大学附属第二医院
- 研究主题:成骨细胞 铁 骨质疏松 铁调素 蓄积
- 肖志锋

- 作品数:11被引量:43H指数:4
- 供职机构:广东省中医院
- 研究主题:椎间盘退变 终板 去势小鼠 骨重塑 椎体骨质疏松
- 王亮

- 作品数:268被引量:1,749H指数:18
- 供职机构:中国人民解放军总医院
- 研究主题:骨密度 骨质疏松 骨质疏松症 2型糖尿病 标志物
- 李锋

- 作品数:803被引量:4,221H指数:25
- 供职机构:华中科技大学同济医学院
- 研究主题:骨质疏松 颈椎 后路 腰椎 破骨细胞分化
- 宋超

- 作品数:13被引量:3H指数:1
- 供职机构:华中科技大学同济医学院
- 研究主题:破骨细胞分化 破骨细胞 骨质疏松 去势小鼠 REV-ERB