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一种芸薹属植物叶片原生质体制备和转化的方法: 本发明涉及植物基因工程领域，具体涉及一种适用于所有芸薹属下植物叶片原生质体制备和转化的方法。本发明通过改变酶的选择和用量、酶解缓冲液的配方，以此满足芸薹属下不同植物叶片的原生质体制备需求。通过改变MMG溶液和转化液配方、...; 陈之光赵瑞李双乐

马尾松原生质体制备及瞬时转化体系的建立: 2025年; 该研究旨在通过建立马尾松(Pinus massoniana)原生质体的分离和制备系统,实现基因的瞬时转化,从而推动马尾松基因功能研究和遗传转化体系的发展。研究选取了马尾松不同发育时期的外植体材料,包括针叶、下胚轴和愈伤组织,探讨了不同酶解条件对原生质体分离效率的影响,并通过试验优化了马尾松原生质体的制备流程,涉及不同类型的组织、不同的渗透压和酶解时间。研究结果表明:在0.5 mol⋅L-1甘露醇渗透液中,使用马尾松针叶组织进行6 h酶解处理是提取原生质体的最佳条件。基于此,该研究构建了一个适合马尾松的瞬时转化体系,并通过对比不同转化条件,实现了外源基因在马尾松原生质体中的瞬时表达。研究还发现,经过优化的原生质体制备体系能够显著提升原生质体的质量和转化效率,在使用聚乙二醇(PEG)介导的转化方法时,转化效率高达47.83%。综上,该研究成功构建了马尾松原生质体高效分离体系,为针叶树种基因功能解析提供了可靠的瞬时表达系统。; 李岩硕王民炎刘殿宽李伟殷恒福; 关键词：马尾松原生质体基因功能

一种烟草原生质体制备方法: 本申请属于烟草组织器官解剖技术领域，具体涉及一种烟草原生质体制备方法。该方法针对烟草根部细胞、或者烟叶细胞的原生质体制备分离应用，包括：准备酶解液、材料预处理、酶解提取、原生质体分离等步骤。在对现有植物细胞原生质体提取方...; 翟妞郑庆霞徐国云张慧周会娜刘萍萍陈千思王晨金立锋

云南松原生质体制备及优化: 2024年; 【目的】优化与构建云南松原生质体制备与纯化技术体系,为云南松原生质体培养、融合及瞬时表达体系的建立奠定基础。【方法】以云南松幼苗为试验材料,探索纤维素酶质量分数、离析酶质量分数、甘露醇浓度、真空处理时间、酶解条件和离心条件对云南松针叶原生质体制备的影响。【结果】云南松幼嫩针叶酶解前真空处理是必要的,且先在1.00%纤维素酶+0.80%离析酶+0.3 mol/L甘露醇的酶解液中抽真空10 min,然后在26℃、130 r/min条件下酶解4 h,再以180 r/min离心5 min,原生质体产量达5.98×10^(7)个/g,活力为72.22%。此外,利用优化的原生质体制备程序,从云南松幼苗的根和茎中制备原生质体,其产量分别为4.35×10^(7)和5.27×10^(7)个/g。【结论】本研究以云南松幼苗为试验材料,建立了原生质体制备及优化技术体系,研究结果为云南松体细胞杂交、瞬时表达体系等研究的开展提供了技术支撑。; 陈思慧孙大宽沙合热扎提·吾素云王何泽田自能唐军荣; 关键词：云南松原生质体制备酶解法

一种绣球原生质体制备及瞬时转化的方法: 本发明涉及一种绣球原生质体制备及瞬时转化的方法，属于细胞生物学技术领域；本发明选择绣球叶片，将叶缘切除，垂直于主叶脉将叶片切条，放入酶解液中酶解；酶解后加入W5溶液终止消化，然后过滤得到绣球原生质体；并将原生质体瞬时转化...; 陈双双邓衍明齐香玉冯景陈慧杰秦紫艺王华娣

一种快速高效的菠萝原生质体制备方法及应用: 本发明属于植物细胞技术领域，具体涉及一种快速高效的菠萝原生质体制备方法及应用。本发明提供一种制备菠萝原生质体的方法，将试材预先进行暗处理，去除表皮后进行酶解、纯化。该方法得到的菠萝原生质体的活力高，转化效率能达到20％，...; 贺涵阳习鹏刘传和庄庆礼谢琦

一种利用原生质体制备纳米细菌囊泡的方法及其应用: 本发明提供了一种利用原生质体制备纳米细菌囊泡的方法及其应用，所述方法包括：将不同种细菌分别与溶菌酶混合，得到细菌的原生质体后，混合不同细菌来源的原生质体进行超声破碎，经脂质体挤出器挤压，离心，收集沉淀，即得纳米杂合细菌囊...; 朱墨桃杨尹默刘光年

一种“派露丝”香蕉的原生质体制备和融合方法: 本发明公开了一种“派露丝”香蕉的原生质体制备和融合方法，该方法是将华蕉突变体“派露丝”胚性悬浮系在复合酶液中进行酶解获得原生质体，复合酶液的组成包括204～210mM KCl、67～73mM CaCl<Sub>2</Su...; 李春强孙建波彭明

黑曲霉糖化酶工业菌株CBS 513.88原生质体制备条件的优化被引量：2: 2024年; 【目的】优化黑曲霉糖化酶工业菌株CBS 513.88原生质体制备条件,促进其基础研究和分子改造。【方法】通过考察酶解液成分与比例、酶解条件、渗透压稳定剂和菌体生长条件对黑曲霉CBS 513.88原生质体制备的影响,优化其制备条件,并通过聚乙二醇介导的原生质体转化方法测试原生质体的转化效率。【结果】适合黑曲霉CBS 513.88原生质体制备的材料为改良ME培养基培养10 h的菌丝,酶解条件为在10 g·L^(-1)溶壁酶Glucanex和10 g·L^(-1)蛋清溶菌酶的破壁酶溶液(pH值5.8)33℃、110 r·min^(-1)酶解1.5 h,渗透压稳定剂为0.7 mol·L^(-1)KCl+0.27 mol·L^(-1)CaCl_(2)。在此制备条件下,原生质体悬液含量最高可达2×10^(7)个·mL^(-1);原生质体再生培养基为添加0.7 mol·L^(-1)KCl的ME培养基,其最大再生率为52%;转化率最高为206个·μg-1 DNA(质粒),阳性率为94.4%。【结论】通过对黑曲霉CBS 513.88原生质体制备条件的优化,建立短时高效的原生质体介导遗传转化体系。; 赵君张震董飞宇徐轶凡陈红歌; 关键词：原生质体制备原生质体再生遗传转化体系

重寄生枝孢菌的原生质体制备条件优化及抗性筛选: 2024年; 为探究重寄生枝孢菌最佳原生质体的制备条件,摸索枝孢菌原生质体遗传转化体系。采用单因素试验和响应面法对枝孢菌的原生质体制备条件,包括菌龄、酶解浓度、酶解时间和渗透压稳定剂进行筛选与优化。结果显示:在菌龄为17 h,崩溃酶浓度为25 mg·mL^(-1),酶解时间为2.5 h以及使用0.7 mol·L^(-1)NaCl作为渗透压缓冲液的条件下,其原生质体产量最高。响应面分析进一步确定了最佳条件为菌龄17.51 h,酶解液浓度26.74 mg·mL^(-1),酶解时间2.26 h,预测原生质体数量为3.52×10^(6)mL^(-1)。复测实验结果得到原生质体产量约为4.01×10^(6)mL^(-1),比预测产量高出12.2%。敏感性实验发现重寄生枝孢菌对潮霉素敏感,其生长在20 mg·L^(-1)潮霉素浓度下受到抑制。研究结果成功优化了重寄生枝孢菌原生质体的制备条件,并筛选出20 mg·L^(-1)潮霉素作为后续分子遗传转化的条件,为重寄生枝孢菌的生物防治研究提供了理论基础。; 李明娇范世昌严梦玲陈晨李靖; 关键词：重寄生菌原生质体制备响应面法

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