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乌拉尔甘草GubHLH基因克隆与原核表达: 2025年; 目的构建乌拉尔甘草基本螺旋-环-螺旋(GubHLH)转录因子的原核表达载体并进行原核表达及鉴定。方法从乌拉尔甘草根中提取总mRNA,反转录得到cDNA后PCR扩增获得GubHLH基因全长,构建原核表达载体pET28a-GubHLH,分析GubHLH表达的最佳IPTG浓度、温度和时间条件。结果获得的重组质粒pET28a-GubHLH在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中的最佳诱导条件为37℃下用0.2 mmol/L的IPTG诱导目的蛋白3 h。结论成功构建GubHLH蛋白原核表达体系,并获得重组质粒pET28a-GubHLH在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中的最佳诱导条件。; 张艺朦付业繁赫苯玎陈晓芳孙欣李欣方圆; 关键词：甘草原核表达

木薯MePOD10基因克隆及原核表达分析: 2025年; 【目的】克隆木薯(Manihot esculenta Crantz)过氧化物酶基因MePOD10并进行生物信息学分析、原核表达分析和蛋白酶动力学分析,为进一步研究MePOD10基因的功能提供参考。【方法】从木薯‘华南124’('South China 124','SC124')中扩增MePOD10基因编码区序列(coding sequence,CDS),对其进行生物信息学分析,并构建MePOD10-pET28a融合表达载体,再转化至BL21感受态细胞中进行蛋白诱导,通过SDS-PAGE以及Western blotting确定MePOD10蛋白的表达情况,纯化MePOD10蛋白后进行酶活性和动力学分析。【结果】MePOD10基因CDS序列长度为981 bp,编码326个氨基酸,蛋白分子量为35069.60 Da,理论等电点为6.59,属于不稳定疏水性蛋白。MePOD10含有植物过氧化物酶保守结构域,其氨基酸序列与橡胶树POD蛋白的相似性最高,为93.25%。在37℃、1 mmol·L^(-1)异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-Thiogalactoside,IPTG)诱导6 h条件下,上清和沉淀均有蛋白表达,纯化后的上清蛋白酶活性高于对照蛋白,以愈创木酚为底物时,随着底物浓度增加,MePOD10蛋白催化活性迅速增加,之后趋于平稳,说明MePOD10蛋白具有催化活性。【结论】MePOD10蛋白具有过氧化物酶(Peroxidase,POD)保守结构域,在37℃、1 mmol·L^(-1)IPTG诱导6 h条件下,MePOD10-pET28a融合蛋白能正确表达,纯化后的融合蛋白具有催化活性。; 何雪强吴姝林慧靖陈奥王苗史钊辉闫语; 关键词：木薯过氧化物酶原核表达酶活性

木薯MebZIP11基因克隆与原核表达分析: 2025年; 【目的】研究木薯A类碱性亮氨酸拉链11(Manihot esculenta basic leucine zipper11,MebZIP11)基因的功能,为探讨其转录因子在逆境胁迫中的作用提供依据。【方法】利用RT-PCR技术克隆木薯中的MebZIP11基因,并进行生物信息学分析。通过荧光定量PCR技术,分析MebZIP11基因在木薯不同组织和块根发育不同阶段中的表达模式,并评估其在多种逆境条件下的响应机制。【结果】MebZIP11基因位于木薯的第5号染色体,编码区全长1221 bp,具有典型的bZIP结构特征。序列比对显示,MebZIP11与麻风树和橡胶树的A类bZIP转录因子的序列同源性分别为80.00%和85.41%,确认其属于A类bZIP亚族。亚细胞定位试验显示,MebZIP11位于细胞核内。MebZIP11基因在储藏根的表达量最高。MebZIP11基因的表达量在甘露醇、NaCl和脱落酸处理下均显著升高,在H_(2)O_(2)和低温处理下其表达量均下降。通过原核表达系统获得了MebZIP11蛋白。【结论】木薯中的MebZIP11基因属于A类bZIP家族。MebZIP11基因在不同逆境和激素处理下表现出不同的响应程度。; 雷鑫芳潘子墨林素妍罗佳科吴春来曾坚胡伟; 关键词：木薯非生物胁迫逆境响应原核表达

一种原核表达系统及其制备方法和应用: 本发明公开了一种原核表达系统及其制备方法和应用。所述原核表达系统包括表达脯氨酰羟化酶功能性亚基P4HB和P4HA1以及密码子AUA、AGG、AGA、CUA、CCC、GGA和CGG的转运RNA的原核细胞。本发明在原核表达体...; 裴运林孙云起王宁郭朝万聂艳峰陈杰

一株突变的尿酸酶原核表达工程菌的构建方法: 本发明公开了一株突变的尿酸酶原核表达工程菌的构建方法，属于基因工程技术领域。本发明将来源于黄曲霉菌的尿酸酶编码基因进行4处活性位点突变，获得尿酸酶编码基因UOX2，通过构建UOX2编码基因的重组表达载体，并将重组表达载体...; 卢志明成士清高华孙冠军董雯周东

野菊中三个黄酮苷合成UGT基因克隆及原核表达: 2025年; 目的克隆野菊中三个黄酮苷合成UGT基因,利用原核系统融合表达,为进一步研究这些基因在黄酮苷类物质合成中的功能提供了依据。方法从湖北二倍体野菊(Chrysanthemum indicum L.)的花组织cDNA中成功克隆了3个候选糖基转移酶(UDP-glycosyltransferase,UGT)家族基因:即:CiUGT1(1425 bp)、CiUGT2(1311 bp)和CiUGT3(1314 bp),其编码的蛋白质分子量分别为51.72、48.08和48.28 kDa。经蛋白理化性质分析后,利用无缝克隆技术构建了重组质粒,其中CiUGT2与CiUGT3的重组蛋白在大肠杆菌系统中成功表达。结果SDS-PAGE分析显示,纯化后的CiUGT2和CiUGT3蛋白样品浓度分别约为0.2 mg·mL^(-1)和1.4 mg·mL^(-1)。结论获得了两个野菊中参与催化黄酮-7-O-葡萄糖苷合成的候选UGTs,为解析野菊头状花序中黄酮苷类物质生物合成的分子机制提供理论依据。; 秦志伟廖家豪张景景刘义飞胡志刚刘晶晶; 关键词：野菊 UGT 原核表达黄酮

结核分枝杆菌PPE68蛋白稳定片段的原核表达及纯化: 2025年; 目的了解结核分枝杆菌PPE68稳定片段,对稳定片段蛋白进行原核表达及纯化,为PPE68的结构解析奠定基础。方法使用Expasy-ProParam、MEME等生信网站对PPE68的基本性状和序列进化保守性进行分析;使用双酶切方法,PCR扩增PPE68基因,并克隆到pGL01载体上;使用大肠埃希菌BL21(DE3)进行PPE68片段蛋白的原核表达,在IPTG(isopropylβ-D-thiogalactoside)诱导表达后,利用SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis)电泳分析表达产物并使用镍离子亲和层析及凝胶过滤层析的方法对表达产物进行体外纯化。后通过胰蛋白酶切实验、质谱分析确定PPE68最稳定片段。结果生物信息学分析初步确定了PPE68可能的稳定片段为第7-354个氨基酸并成功构建pGL01-PPE68(7-354aa)表达载体,蛋白表达纯化后获得2.4mg/mL的PPE68(7-354aa)片段蛋白但纯度较低;针对纯化的PPE68(7-354aa)蛋白较杂问题进行胰蛋白酶切和质谱分析找到稳定片段,为PPE68的第7-180个氨基酸,构建质粒后在大肠埃希菌中能稳定表达并获得2.9mg/mL的纯化蛋白,蛋白纯度可达95%以上。结论成功找到结核分枝杆菌PPE68的稳定氨基酸序列,为未来PPE68蛋白晶体结构解析以及进一步结核病诊断和疫苗开发奠定基础。; 程龙云谢荣现李丽袁西露祝姚姚刘晓宇李冰清; 关键词：结核分枝杆菌 PPE68 原核表达蛋白纯化

金黄色葡萄球菌肠毒素C基因的克隆与原核表达: 2025年; [目的]制备金黄色葡萄球菌肠毒素C。[方法]利用PCR技术从金黄色葡萄球菌的基因组中克隆肠毒素C(SEC)基因,PCR产物与pET-28a(+)载体连接,构建表达SEC的原核表达载体(pET-28a(+)-SEC),转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,并利用Ni-NTA纯化SEC目的蛋白。[结果]成功克隆了SEC基因,构建了SEC的原核表达载体pET-28a(+)-SEC,并在大肠杆菌BL21(DE3)中被成功表达,在不同浓度IPTG(0.4 mmol/L、1 mmol/L)、不同温度(30℃、37℃)下,SEC蛋白表达量相近,占菌体蛋白总量的50%以上;重组菌株在1 mmol/L IPTG诱导物37℃诱导6 h,可溶性的SEC目的蛋白占SEC蛋白总表达量的30%以上;可溶性的SEC经Ni-NTA亲和层析纯化,纯度近90%。[结论]经克隆、表达和纯化的较高纯度的SEC蛋白为SEC蛋白来源提供一种新选择。; 江学斌成雪鸿马苗鹏; 关键词：金黄色葡萄球菌原核表达可溶性蛋白蛋白纯化

沙糖橘几丁质酶基因orange1.1t05124的克隆及原核表达: 2025年; 柑橘几丁质酶作为一种重要的抗真菌蛋白,可以降解真菌细胞壁中的几丁质。利用沙糖橘的cDNA文库克隆了沙糖橘几丁质酶基因orange1.1t05124。该基因位于第8染色体末端,包含3个外显子。将该基因克隆到pEASY-Blunt E1载体中,测序验证序列无误,随后转入大肠杆菌BL21(DE3)中,经异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导生成了目的蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE电泳)验证成功表达,在产物的包涵体中纯化到了目标蛋白。通过生物信息学分析发现,该蛋白具有信号肽,定位在细胞外,是单体的球状蛋白质。通过进化树分析发现,该几丁质酶在植物中广泛存在同源蛋白质,且都含有GH19几丁质酶催化结构域。对柑橘几丁质酶基因进行克隆和表达,可为了解该基因家族的抗病机理和开发基于几丁质酶的新型生物农药、生物肥料提供基因资源。; 胡亚平陈聪吉前华郭雁君郭丽英蒋惠杨凤梅; 关键词：几丁质酶基因原核表达

小豆利钠肽VaEG45的原核表达纯化和生物活性分析: 2025年; 为获得小豆利钠肽VaEG45纯化蛋白并明确其生物活性,利用pET-30a(+)构建VaEG45原核表达载体,大肠杆菌原核表达系统表达VaEG45蛋白,Ni-NTA层析柱纯化VaEG45蛋白,并用纯化蛋白处理小豆原生质体检测其活性。结果表明:构建的p ET-30a-His-VaEG45重组载体可使His-VaEG45蛋白在大肠杆菌中正确高效表达,表达蛋白分子量为11.6 kDa,纯化后蛋白浓度为0.49 mg·mL^(-1),纯度为90%;生物活性分析发现,His-VaEG45纯化蛋白可刺激小豆原生质体细胞膨大。研究成功表达并纯化了具有生物活性的His-VaEG45蛋白,为深入解析VaEG45蛋白参与小豆抗锈病的生理和分子机制提供基础。; 王慧鑫孙伟娜柯希望左豫虎; 关键词：小豆蛋白表达生物活性

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