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一种鸡原始生殖细胞转染方法: 本发明公开了一种鸡原始生殖细胞转染方法，包括如下转染步骤：S1、将鸡原始生殖细胞的分离，并分组培养在培养基中，S2、按照pPB‑GFP转座子质粒和转座酶质粒mPB用量3.5:1的比例将二者混合，S3、先用opti‑MEN...; 杨朝武余春林邱莫寒张增荣熊霞朱思量胡陈明杨礼樊华夏波宋小燕彭涵陈家磊汪江先杜龙环熊柱翔黄思宇

一种鸡原始生殖细胞的电转染方法: 本发明公开了一种鸡原始生殖细胞的电转染方法。属于生物技术领域。该方法包括如下步骤：(1)鸡原始生殖细胞的培养及计数；(2)将计数之后的鸡原始生殖细胞与电转缓冲液、待转染材料混合，得到电转染体系；所述待转染材料为miRNA...; 赵智锋姜自琴邹娴罗成龙何燕华徐振强朱颖舒鼎铭

一种鸡原始生殖细胞定点插入外源基因的方法: 本发明公开了一种鸡原始生殖细胞定点插入外源基因的方法。属于生物技术领域。本发明方法包括如下步骤：鸡原始生殖细胞的培养及计数；构建定点插入外源基因的基因编辑质粒和供体质粒；将计数之后的鸡原始生殖细胞与电穿孔转染缓冲液、基因...; 邹娴赵智锋罗成龙何燕华朱颖舒鼎铭

ATP5B 调节鸡原始生殖细胞形成的功能初探: 2025年; 为了研究ATP5B在鸡原始生殖细胞(PGCs)形成过程中的具体功能,通过构建家鸡ATP5B的短发夹RNA(shRNA)的慢病毒干扰载体,制备低表达ATP5B的鸡胚胎干细胞(ESCs)株,并对ATP5B在ESCs分化为PGCs过程中的功能进行研究。依据家鸡ATP5B的转录本设计2个RNA干扰靶点以构建ATP5B干扰载体,通过qRT-PCR方法检测各靶点对ATP5B的干扰效率,筛选出干扰效率最高的shRNA干扰载体,并进行慢病毒包装。利用ATP5B的慢病毒载体侵染ESCs后进行视黄酸(RA)诱导,观察细胞的形态变化,并收集各组不同时间的细胞,通过qRT-PCR、流式细胞术和间接免疫荧光等方法检测PGCs的形成效率以及生殖相关的标记基因相对表达量变化。结果表明,ATP5B干扰载体被成功构建,分别命名为sh ATP5B-1、sh ATP5B-2,其中sh ATP5B-2干扰效率高。ATP5B低表达的ESCs细胞株,体外利用RA诱导,6 d后观察发现PGCs样细胞明显增多,且C-kit和Cvh等PGCs形成标记基因的表达极显著上升(P<0.01),而Oct4和Nanog等多能性标记基因的表达则极显著下降(P<0.01)。ATP5B表达抑制后,CVH标记阳性细胞比率极显著高于对照组(P<0.01)。本研究成功制备了ATP5B低表达的ESCs细胞株,证实ATP5B可以作为ESCs分化为PGCs的一个体外负向调控因子,为系统解析鸡PGCs的发生机制提供研究基础。; 孙长花赵娟娟姚泽令; 关键词：胚胎干细胞分化原始生殖细胞

用于产生原始生殖细胞样细胞的方法和组合物: 本文提供了通过过表达转录因子(例如DLX5、HHEX和/或FIGLA)将诱导多能干细胞分化为原始生殖细胞样细胞的方法和组合物。; C·克拉默尔M·P·斯梅拉P·查特尔吉G·M·彻尔驰

IGF-1替代胰岛素在促进鸡原始生殖细胞增殖中的应用: 本发明公开了IGF‑1替代胰岛素在促进鸡原始生殖细胞增殖中的应用。本发明通过IGF‑1替代胰岛素在促进鸡原始生殖细胞增殖中发挥作用，可以明确PI3K‑AKT信号通路是PGCs增殖所必需的，为其他信号通路小分子研究提供理论...; 刘欣左其生李碧春龚威吴骏吕晓倩牛英杰靳锴

代谢产物泛酸的筛选及其在原始生殖细胞形成过程中的功能验证: 2025年; 研究旨在探究差异代谢物泛酸(PA)对鸡胚胎干细胞(ESCs)向原始生殖细胞(PGCs)分化过程中的作用,为从代谢角度解析PGCs形成机制提供新的理论基础。试验基于转录组学筛选出PA,通过CCK8与EdU试验探究PA及其代谢抑制剂PZ的适宜添加浓度;最后,分别通过观察细胞形态、qRT-PCR检测PGCs特异标记基因、间接免疫荧光和流式细胞分析等分析PA代谢在ESCs向PGCs分化过程中的作用。结果显示:参与PA代谢相关的基因在ESCs与PGCs中呈现差异性表达,且富集于生殖细胞分化相关的通路(Pantothenate and CoA biosynthesis、TGF-beta signaling pathway和AMPK signaling pathway);PA和PZ的适宜添加浓度分别为20μmol/L和80 nmol/L;PA组在第6天的类胚体数目显著低于PZ组,PA组中CVH和C-KIT3的表达量显著低于PZ组(P<0.01);PA组的DDX4阳性细胞数显著低于PZ组(P<0.01)。结果表明添加PA抑制PGCs的形成,添加PZ促进PGCs的形成。; 程富富武嵘峰耿晴晴赵梓多王哲牛英杰左其生张亚妮; 关键词：胚胎干细胞原始生殖细胞

一种促进鸡原始生殖细胞增殖的无鸡血清培养基及其应用: 本发明公开了一种促进鸡原始生殖细胞增殖的无鸡血清培养基及其应用，所述培养基中采用卵转铁蛋白代替鸡血清。本发明公开了一种采用卵转铁蛋白代替PGCs培养体系中鸡血清的作用，可以保持PGCs自我更新，从而为探究稳定的培养体系提...; 左其生刘欣李碧春龚威吕晓倩牛英杰靳锴

KillerRed介导消除鸡原始生殖细胞的研究: 2024年; 【目的】构建特异性表达KillerRed(KR)的鸡原始生殖细胞系(PGCs),为制备生殖细胞可消除的受体鸡胚和提高外源PGCs在嵌合体中的基因传递效率提供理论参考。【方法】利用hyPBase转座酶将KR整合到鸡胚成纤维细胞系(DF-1)基因组中,建立稳定表达CAG-KR-EGFP的DF-1细胞系(KR-DF-1)。利用绿光照射细胞,台盼蓝染色检测DF-1的消除效率。采用CRISP/Cas9系统将KR定点敲入到鸡生殖细胞水平的PGCs中DAZL基因的第11号外显子中,建立生殖细胞特异表达DAZL-KR-EGFP的PGCs细胞系(KR-PGCs)。利用绿光照射细胞,台盼蓝染色检测PGCs消除效率。实时荧光定量PCR检测生殖细胞特异性表达基因的相对表达量。显微注射KR-PGCs到受体鸡胚,孵化产生嵌合体后代,PCR检测嵌合体后代精液中是否含有KR。【结果】成功构建KR-DF-1,与野生型DF-1相比,细胞增殖无显著差异(P>0.05,下同);绿光照射后,KR-DF-1死亡率极显著升高(P<0.01,下同);成功构建KR-PGCs,绿光照射后,KR-PGCs死亡率极显著升高,细胞核呈破碎状;绿光照射12h,KR-PGCs中SOD2和CAS3基因相对表达量极显著升高;细胞计数结果显示,KR-PGCs在绿光照射后出现负增长;KR-PGCs的特异性基因DAZL、DDX4、Pou5f3、NANOG和DNA1正常表达,仍具有迁移定植到性腺的能力,且性成熟嵌合体公鸡精液能产生含KR的精液。【结论】成功构建了在DAZL基因位点特异性表达KR的KR-GCs细胞系,且绿光照射后可特异性消除KR-PGCs。通过显微注射成功获得了含有KR-PGCs且能产生含KR精液的嵌合体后代。; 张嘉乐黄振文贾肖轩彭煜琳温静儿季娜许惠艳刘兴廷冉明霞陆阳清; 关键词：原始生殖细胞嵌合体

一种鸡原始生殖细胞体外无血清扩增培养的方法: 本发明公开了一种鸡原始生殖细胞体外无血清扩增培养的方法，属于生物工程技术领域，包括以下步骤：培养基的配置：培养基中不含胎牛血清，所述培养基中包括多种抑制剂；鸡原始生殖细胞的分离与培养：将种蛋进行孵化，将种蛋打开后置于培养...; 张珍华

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