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一种新型蛋白凝胶过滤层析柱: 本实用新型涉及凝胶过滤层析技术领域，具体为一种新型蛋白凝胶过滤层析柱，包括过滤层析柱主体、防护构件、进料构件与滤液导出口，所述进料构件包括加料斗，所述加料斗的内侧设置有支撑杆，所述支撑杆的下侧设置有导流块，所述加料斗的下...; 李波严国权王英雪刘立壮闫广为魏小童阎冰玉黄南男苗讲笑肖迎赵睿瑾刘通薛朦琪苑保凤袁一帆

国产与进口琼脂糖凝胶过滤层析介质对Omicron株新型冠状病毒疫苗分离纯化效果的比较: 2024年; 目的探讨国产与进口琼脂糖凝胶过滤层析介质对Omicron株新型冠状病毒(SARS-CoV-2)灭活疫苗的分离纯化效果,为促进层析介质的国产替代提供数据支持。方法选取3批SARS-CoV-2 Omicron株灭活病毒浓缩液,分别使用国产与进口琼脂糖凝胶过滤层析介质在相同实验条件下进行纯化,收集病毒峰并检测收集组分中的抗原含量、蛋白质含量、Vero细胞DNA残留量、Vero细胞宿主蛋白残留量、牛血清白蛋白残留量等相关质量参数,并计算比活性和抗原回收率。结果在采用10%柱体积和30 cm/h线性流速对两种填料进行上样纯化之后,所得收集组分的平均抗原回收率分别为55.29%和53.31%,差异无统计学意义(t=1.44,P>0.05),比活性、Vero细胞DNA残留量及Vero细胞宿主蛋白残留量间差异也无统计学意义(t分别为-0.25、1.31和0.66,P均>0.05),仅牛血清白蛋白残留量差异有统计学意义(t=-2.73,P<0.05)。结论采用国产与进口琼脂糖凝胶过滤层析介质纯化SARS-CoV-2 Omicron株灭活病毒浓缩液,所得收集组分各项质量参数间除牛血清白蛋白残留量外均无显著差异,因此,在纯化Omicron株SARS-CoV-2灭活疫苗时,可考虑使用该国产层析介质替代进口层析介质。; 庞嘉辉郝鹏亮郭长福孟胜利郭靖明平刚; 关键词：新型冠状病毒灭活疫苗琼脂糖凝胶介质

凝胶过滤层析结合液相色谱-串联质谱法测定血清中游离甲状腺激素: 2023年; 基于凝胶过滤层析(GFC)进行前处理,结合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)建立了血清中游离三碘甲腺原氨酸(FT3)和游离甲状腺素(FT4)的高通量、高灵敏检测新方法。选用Sephadex LH-20凝胶小柱对150μL血清样本进行过滤分离,先用Tris-HCl缓冲液(0.1 mol/L,pH 7.4)淋洗去除结合蛋白的甲状腺激素,然后用甲醇对游离的甲状腺激素进行洗脱,采用LC-MS/MS法进行检测和定量,并进行方法学验证。结果显示:FT3和FT4的线性相关系数(r^(2))均不小于0.9995,批内及批间相对标准偏差为1.8%~10%,准确度为85.4%~110%,基质效应为85.8%~114%,回收率为85.8%~107%。采用该方法与平衡透析法(ED)同时检测了95份血清样本,使用IBM SPSS Statistics 26和MedCalc统计软件(v.20.0.0)对检测结果进行配对t检验分析、PassingBablok回归分析和Bland-Altman一致性分析。结果表明,GFC/LC-MS/MS与ED/LC-MS/MS法对血清中FT3、FT4的测定结果无统计学差异(P>0.05)。所建立的方法快速、简便,受干扰因素相对较少,便于临床推广,可为临床实验室游离甲状腺激素的快速、高效、准确检测提供参考方法,同时为其它游离激素的检测提供了一种新的思路。; 邹海飞李敏邓顺艳夏兵夏兵; 关键词：液相色谱-串联质谱法游离甲状腺激素凝胶过滤层析血清

一种新型蛋白凝胶过滤层析柱: 本实用新型涉及层析柱技术领域，且公开了一种新型蛋白凝胶过滤层析柱，包括底座与层析柱本体，所述底座的顶部固定安装有升降调节机构，所述层析柱本体的底部设置有过滤排液机构，所述过滤排液机构包括排液组件与过滤组件，所述过滤组件设...; 常虹

一种凝胶过滤层析介质制备用抽滤装置: 本实用新型公开了一种凝胶过滤层析介质制备用抽滤装置，包括抽滤机主体，所述抽滤机主体的左侧活动连接有储料瓶，所述储料瓶的顶部活动安装有层析柱，所述层析柱的外表面固定安装有支撑架，所述层析柱的内部活动安装有辅助组件，所述辅助...; 高再兴

一种基于凝胶过滤层析的水疱性口炎病毒(VSV)的纯化方法: 2022年; 本研究目的是开发出一套简单有效的水疱性口炎病毒(VSV)的纯化方法,该方法可为基于VSV的医用治疗平台相应的载体,也可为疫苗及溶瘤剂的研发提供一定的技术支撑和物质储备。选用BHK细胞作为VSV复制的载体,并通过显微镜观察细胞病变(CPE)的出现;应用凝胶过滤层析法对收获且处理过的病毒液进行纯化,包括第1轮饱和硫酸铵沉淀高盐除杂和第2轮以严格的吸收峰洗脱为特色的凝胶过滤层析的进一步纯化。通过SDS-PAGE、Western blot、ELISA、电镜验证等分析纯化产物的纯度和准确性。SDS-PAGE显示本方法明显除去病毒上清中大部分杂质;Western blot、ELISA、电镜证实纯化产物是VSV病毒。经使用Reed-Muench法计算病毒的半数组织细胞感染量(TCID)效价为10,RT-PCR的方法鉴定毒株为印第安纳毒株(Indiana, IN)。上述结果表明,本研究成功研制出一套方便、高效、简易的VSV纯化方法,为VSV的纯化和使用提供了参考依据。; 孙赫岳玉环赵永坤吴广谋田园张守峰张国利李泽鸿; 关键词：VSV 凝胶过滤层析透射电镜

凝胶过滤层析一步纯化MC-LR Fab的方法及吸附机制初探: 2019年; 为高效制备高纯微囊藻毒素(MC-LR)Fab片段,采用木瓜蛋白酶酶解腹水中纯化获得的单克隆抗体,利用该Fab片段与凝胶过滤层析介质结合的特殊现象分离酶解混合物。通过单因素实验考察流动相中离子强度和pH对Fab片段在柱中保留行为的影响,结合Fab片段等电点(pI)及聚集性质分析二者结合机制。结果表明,腹水经protein G纯化得到纯度大于90%的IgG,IgG经木瓜蛋白酶酶解,主要产物为Fab片段、Fc片段和少量IgG,酶解混合物经凝胶过滤层析一步纯化获得纯度为94.5%,回收率为51%,对MC-LR抑制率为94%的Fab片段。Fab片段pI为6.02,由于表面较强疏水性产生聚集,疏水吸附导致Fab片段与凝胶过滤层析介质结合,降低流动相中离子强度,减弱疏水作用同时提高pH增强离子排阻作用可使Fab片段消除吸附,实现了Fab片段的高效制备。; 焦文阳陆宁王兰腾关甜雷红涛沈兴; 关键词：凝胶过滤层析纯化疏水作用

凝胶过滤层析纯化白喉类毒素工艺的优化: 2018年; 【摘要】目的通过定制设计优化白喉类毒素（diphtheria toxoid，DT）层析纯化工艺。方法将经硫酸铵沉淀的精制DT原液浓缩后分别用Sepharose4FF（4FF）和SephaerylS-300（S-300）凝胶过滤层析进行进一步纯化。根据定制设计，将上样体积、样品浓度、洗脱流速、层析介质设为实验因子，将层析载量、纯度、收率设为响应值，建立数学模型，确定凝胶过滤层析的最优层析参数，并对实验结果进行工艺验证。结果定制设计的实验结果显示，8-300凝胶过滤层析纯化的DT纯度和收率均高于4FF凝胶过滤层析。进一步分析确定，8-300凝胶过滤层析的最佳参数为：上样体积2．5％，样品浓度45mg／ml，洗脱流速45cm／h。当以最佳参数进行S-300凝胶过滤层析纯化时，层析工艺的验证结果符合预期。结论8-300比4FF更适宜作为DT纯化工艺的凝胶层析介质。; 何岩张明华邓海清段霄李硕航杨朝晖刘建凯郑海发; 关键词：白喉类毒素色谱法凝胶

凝胶过滤层析法调节脂质体内外水相pH的探讨被引量：3: 2017年; 通过对脂质体内外水相pH梯度的制备方法的探讨,采用凝胶过滤层析技术将脂质体外水相的pH4.0柠檬酸缓冲液替换成pH 7.2磷酸盐缓冲液,在脂质体内外水相形成pH梯度。在药脂比为1∶5、1∶10、1∶15和1∶20(质量比)时,阿霉素在pH梯度的驱动下从脂质体外水相穿越脂质双分子膜进入内水相,包封率分别达到96.7%、98.7%、96.8%和95.1%,其中药脂比1∶10时包封率达到最高。药脂比1∶10制备的阿霉素脂质体在37℃,12 h内阿霉素泄漏均低于1.0%;48 h内药物泄露率低于5.0%。通过该实验,使学生们能够观测到如何采用凝胶过滤层析技术调节pH梯度,以及pH梯度在阿霉素脂质体主动载药过程中的重要性,为脂质体递释系统的课堂理论教学奠定了良好的实验基础。; 刘敏陆伟跃潘俊谢操; 关键词：凝胶过滤层析脂质体

利用凝胶过滤层析技术分离人源γ-微管环形复合物被引量：2: 2016年; 目的分离人源γ-微管蛋白环形复合物(γ-tubulin ring complex,γTuRC)。方法利用凝胶过滤层析技术分离人源293FT细胞裂解产物;利用免疫印迹检测γTuRC和γ-微管蛋白小复合物(γ-tubulin small complex,γTuSC)所在的洗脱组分,实现复合物与游离蛋白分离。结果γTuRC复合物组成型组分γ-微管蛋白(γ-tubulin)、γ-微管蛋白复合物蛋白2(γ-tubulin complex protein 2,GCP2)、GCP3和GCP4在第4洗脱组分(4#)被洗脱富集,该组分相对分子质量约为2×106;γTuSC复合物组成型组分γ-tubulin、GCP2、GCP3蛋白在14#洗脱组分被洗脱富集,该组分相对分子质量约为3.1×105;未掺入的游离蛋白组分在18#洗脱组分后被洗脱下来。非变性凝胶电泳可在相应组分中检测到γTuRC和γTuSC复合物。结论γTuRC复合物在凝胶过滤层析4#洗脱组分得到富集;γTuSC复合物在14#洗脱组分得到富集。上述复合物与游离蛋白成功分离,可用于后续复合物组装研究。; 陶清萍曹诚张部昌刘萱; 关键词：凝胶过滤层析

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