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棉花发根杆菌转化体系的建立及生根优化
2025年
【背景】棉花是全球最主要的作物之一,生物工程技术应用极大地提高了分子育种的效率,但棉花遗传转化目前存在受基因型限制、时间长和转化方法单一等问题。【目的】建立由发根杆菌(Agrobacterium rhizogenes)介导的高效棉花遗传转化体系,丰富棉花遗传育种方法。【方法】以常用的棉花受体WC和R18为主要试验材料,利用mRUBY作为报告基因,通过诱导生根的激素组合和浓度的筛选优化、不同外植体和不同基因型棉花生根体系差异分析来对发根杆菌介导的生根过程进行优化,在此基础上建立稳定的遗传转化体系,并将该体系应用于基因编辑。【结果】在生根培养基(RIM)中添加萘乙酸(naphthaleneacetic acid,NAA)和洛伐他汀(lovastatin)比单独添加NAA,或添加NAA+吲哚-3-丁酸(indole-3-butyric acid,IBA)、NAA+Lovastatin+IBA更易生根,进一步筛选出最适合诱导出毛状根的萘乙酸和洛伐他汀浓度均为2 mg·L^(-1)。子叶是最易诱导生根的外植体,WC子叶、子叶节和下胚轴单位材料的生根效率分别为398%、72%和39%,且子叶诱导生根时间最短(7 d),比子叶节至少短3 d,比下胚轴至少短8 d;R18最适合诱导生根的外植体也是子叶,但生根数量存在差异。基因型比较表明WC、R18、大棉8号(NDM8)、新陆早61号(XLZ61)、Gb-1和Gb-2每片子叶在侵染后20 d的生根效率分别为398%、116%、199%、103%、57%和0,陆地棉的生根效率均在100%以上,海岛棉在100%以下,其中Gb-2在侵染后35 d才开始生根,陆地棉中常用的受体品种又表现出生根效率略高于生产品种的趋势。遗传转化的阳性率与生根率之间存在一定的差异,侵染后20 d NDM8、XLZ61、Gb-1和Gb-2的转化阳性率依次为59.8%、16.0%、38.5%和0。此外,以获得的阳性根作为后续试验的外植体,进行非胚性愈伤和胚性愈伤诱导,获得了转mRUBY植株,建立了完整的遗传转化体系,且发现植株颜色深浅和mRU
汪炜檬魏云晓唐云霓刘苗苗陈全家邓晓娟张锐
关键词:棉花发根农杆菌毛状根
黄瓜发根杆菌转化体系的建立
2025年
黄瓜是根癌杆菌介导遗传转化获得转基因植株较为困难的物种之一,尽管黄瓜的基因组测序已经完成,但大多数基因的功能尚未确定。发根杆菌介导的毛状根转化能高效地诱导植物产生转基因根,为研究相关基因在根中的生物学功能提供了一种方便、快捷的途径。本研究建立了由发根杆菌介导的高效、快速的适用于在黄瓜活体上诱导产生转基因根的转化方法。利用携带红色荧光蛋白基因DsRed2的发根杆菌K599穿刺接种不同基因型黄瓜幼苗的下胚轴,在高湿状态下培养2周左右。在3种不同基因型黄瓜幼苗的下胚轴穿刺部位生长出毛状根,通过红色荧光蛋白观察及PCR验证,表明89%~94%的穿刺植株携带有转基因毛状根,新生毛状根中转基因根的比例约为55%。由此建立了在活体黄瓜下胚轴诱导产生转基因根的方法,红色荧光蛋白基因DsRed2可以作为报告基因来筛选转基因根与非转基因根,剪去非转基因根和主根后进行移栽种植,即为携带有转基因根而地上茎为非转基因的野生型黄瓜植株,该方法为大规模分析黄瓜根中相关基因的功能、地上-地下信号转导等研究奠定了基础。
樊颖伦徐风琳周慧珍刘欣欣杨欣玥吕山花
关键词:黄瓜发根农杆菌红色荧光蛋白
一种杆菌转化裂殖壶菌的方法和应用
本发明公开了一种杆菌转化裂殖壶菌的方法和应用,所述转化方法是将外源基因导入杆菌,利用杆菌将外源基因导入裂殖壶菌,使裂殖壶菌获得相关外源基因的功能。本发明将转入G418抗性基因表达盒的杆菌AGL‑1与裂殖壶菌HX‑...
黄和黄鹏伟孙小曼马旺贾雨雷李进
一种基于杆菌转化法获得无外源DNA整合的CRISPR编辑白桦或山新杨的转基因方法
本发明提供了一种基于杆菌转化法获得无外源DNA整合的CRISPR编辑白桦或山新杨的转基因方法,涉及基因工程技术领域。包括:将sgRNA克隆到pEgP237‑2A载体中,得到克隆载体;将克隆载体转化到根癌杆菌中,得到转...
王玉成孙士林杨子瑶韩雪吴迪金偌萱牛思源
一种快速高效的水稻成熟胚杆菌转化的方法及其应用
本发明公开了一种快速高效的水稻成熟胚杆菌转化的方法及其应用,涉及水稻遗传学技术领域,本方法通过在常规的基础盐培养基的基础上对特殊组分的取舍和用量调整,制备获得了特殊的诱导培养基、共培养基、筛选培养基和分化培养基。采用这...
段芳
从一道选考题解析杆菌转化法中的“三除”
2024年
从筛除对象、用于筛除的物质、影响筛除效果的因素等方面解析了杆菌转化法中的“三除”:筛除未转化杆菌、筛除共培养的杆菌、筛除未转化的受体细胞,为教师教学和学生深度学习提供参考。
虞银江
关键词:农杆菌转化
一种利用杆菌转化大麦小孢子愈伤组织的方法
一种利用杆菌转化大麦小孢子愈伤组织的方法,使用国产大麦品种‘花22’作为受体材料,通过:1)大麦小孢子提取、诱导培养;2)杆菌侵染大麦小孢子愈伤组织;3)筛选转化后的愈伤组织;4)分化培养及壮苗培养步骤,选定合适的侵...
李颖波郭桂梅何婷刘成洪陆瑞菊
杆菌转化侵染盘
本发明公开了杆菌转化侵染盘,包括侵染底盘和按压板,侵染底盘内开设有侵染内腔,侵染底盘的外侧开设有多个植物固定槽,按压板为网板结构,侵染内腔用于盛接侵染液,植物固定槽用于固定被侵染植物的主枝茎秆,按压板的外框小于侵染内腔...
杨柳王林环喻敏文盈黄佩君邓倩蕾涂旭吴文岚
一种番木瓜愈伤组织杆菌转化受体的制备及转化方法
本发明提供了一种番木瓜愈伤组织杆菌转化受体的制备方法,其特征在于:将番木瓜种子消毒后,先后浸泡于NaClO溶液和KNO3溶液中,再转移到含有抗生素的无菌水中萌发长芽,待芽长出后移植到琼脂培养基中黑暗培养至长苗,将苗的下...
岳晶晶刘娟明瑞光
一种利用发根杆菌转化获得整株转基因木本植株的方法
本发明公开了一种利用发根杆菌转化获得整株转基因木本植株的方法。本发明所述的方法是先将携带目的基因的普通或特定载体转入发根杆菌中,再用活化的发根杆菌菌液侵染预培养的木本植物组培苗,培养至植株长出转基因毛状根后,转至添...
张世忠刘琳郑成超马晓君

相关作者

周雪平
作品数:495被引量:2,028H指数:26
供职机构:中国农业科学院植物保护研究所
研究主题:单抗 杂交瘤细胞株 分泌 双生病毒 病毒
林峻
作品数:76被引量:65H指数:4
供职机构:福州大学
研究主题:休眠孢子 孢子 外源DNA导入 真菌孢子 蛋白质
叶兴国
作品数:232被引量:1,420H指数:24
供职机构:中国农业科学院作物科学研究所
研究主题:小麦 农杆菌 小麦幼胚 转基因小麦 转基因
杜丽璞
作品数:230被引量:1,127H指数:22
供职机构:中国农业科学院作物科学研究所
研究主题:小麦 转基因小麦 纹枯病 抗病性 编码基因
明瑞光
作品数:13被引量:6H指数:2
供职机构:福建农林大学
研究主题:番木瓜 转化受体 农杆菌转化 植株 愈伤诱导