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CRISPR/Cas9基因编辑系统清除乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的研究进展: 2025年; 乙型肝炎病毒(HBV)感染后,很多患者会出现肝衰竭和肝癌等严重后遗症。探寻可从根本上清除HBV的方法成为治疗HBV感染的当务之急。规律成簇间隔短回文重复序列及其核酸酶9(CRISPR/Cas9)基因编辑系统是一种强大的基因组编辑工具。诸多研究证实,CRISPR/Cas9基因编辑系统能够清除细胞中HBV的共价闭合环状DNA,在治疗慢性HBV感染中具有很大的应用潜力。本文总结了CRISPR/Cas9系统在抗HBV感染中的应用现状和研究进展,同时探讨了其可能面临的问题。; 杨嘉茵尹燕锋; 关键词：乙型肝炎病毒

乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA清除的研究进展: 2023年; 乙型肝炎是感染乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)引起肝脏慢性炎症性改变为主要特征的一类传染病。长期慢性感染将导致肝纤维化、肝硬化、肝癌等终末期肝病的发生,严重危害人民群众的健康。慢性乙型肝炎病毒感染依然是全球公共卫生健康问题之一。目前临床上使用的抗病毒治疗方案难以实现对乙型肝炎病毒的彻底清除,其根源在于被感染肝细胞核内持续存在具有稳定结构的共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)。本文对乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA清除的研究进展进行综述,旨在寻找清除cccDNA的途径及办法从而达到乙型肝炎病毒的彻底清除。; 李成莫雪牛文霞李明明付丽娟; 关键词：乙型肝炎病毒基因

基于PCR-CRISPR-cas13a检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的试剂盒: 本发明公开了基于PCR‑CRISPR‑cas13a检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的试剂盒。本发明提供了一种用于检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的试剂盒，含有Cas13a蛋白和crRNA，或者二者形成的复合体；所述c...; 任锋张向颖李浩周育森田原金荣华段钟平陈德喜李伟华

基于规律成簇的间隔短回文重复序列及其相关蛋白技术检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA方法的建立被引量：1: 2022年; 目的建立一种基于规律成簇的间隔短回文重复序列及其相关蛋白(CRISPR/Cas13a)的乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)检测方法。方法提取2017年6月至2020年10月于首都医科大学附属北京佑安医院就诊的4例乙型肝炎患者肝脏总DNA后,使用HindⅢ内切酶和质粒安全性ATP依赖DNA酶(PSAD)分别进行酶切;根据松弛环状DNA(rcDNA)和cccDNA的结构差异,设计特异性扩增HBV cccDNA的引物,对酶切后的产物进行滚环扩增(RCA)和PCR扩增;并筛选crRNA,建立基于CRISPR/Cas13a技术的HBV cccDNA检测新方法。结果利用α-1-抗胰蛋白酶(A1AT)和HBV表面抗原(HBsAg)引物对双重酶切后的产物进行扩增,验证产物中HBV基因组的存在;利用HBV cccDNA和HBV rcDNA引物对PSDA酶切后的产物扩增,验证了产物中只存在HBV cccDNA;利用RCA后的阳性样本作为模板梯度稀释,然后进行PCR扩增转录后使用CRISPR/Cas13a检测,计算出检测下限为10拷贝/μl。结论本研究建立了RCA-PCR-CRISPR-Cas13a的新型检测方法,可对HBV cccDNA进行高灵敏度和高特异性检测,为乙型肝炎患者抗病毒治疗评估、治疗终点的确定以及调整治疗方案提供了有效的监测手段。; 王俊文田原范子豪徐玲高耀曹亚玲潘桢桢张向颖宋岩任锋; 关键词：肝炎病毒乙型共价闭合环状DNA 荧光定量聚合酶链反应

SLF2通过介导乙肝病毒共价闭合环状DNA的PML小体定位抑制病毒转录: 乙肝病毒(Hepatitis B Virus,HBV)感染仍是世界范围内的人类健康隐患之一。目前全球慢性乙肝病毒感染者约有2.57亿人,但现有的治疗药物不能治愈慢性乙肝病毒感染,其原因在于HBV在宿主细胞内形成的共价闭合...; 姚奇艳; 关键词：乙肝病毒转录抑制

乙肝共价闭合环状DNA磁性捕获技术: 本发明公开了一种乙肝共价闭合环状DNA磁性捕获技术。本发明制备HBV cccDNA特异性DNA分子探针磁性纳米微球的方法，步骤如下：(1)采用化学共沉淀法制备Fe<Sub>3</Sub>O<Sub>4</Sub>纳米粒子...; 郭永灿涂植光赵朝辉王友强

靶向共价闭合环状DNA抗HBV治疗的研究进展被引量：1: 2021年; HBV引起尚未治愈的慢性感染,是世界范围内的主要健康负担。共价闭合环状DNA作为稳定的微染色体存在于受感染细胞的细胞核中,当新型治疗手段实现灭活或消除感染肝细胞中持久存在的共价闭合环状DNA,慢性感染自然过程和长期抗病毒治疗将不复存在。介绍了通过基因编辑、表观遗传修饰等方法靶向共价闭合环状DNA,以期完全性治愈HBV感染。; 王艺颖刘熙称朴荣利秦俊杰; 关键词：共价闭合环状DNA 乙型肝炎病毒

两种抽提乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA方法的效果比较被引量：1: 2021年; 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)作为一种嗜肝DNA病毒,在感染肝细胞后会在细胞核中形成病毒转录复制的模板和基因储存库——共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA),其持续存在是乙型肝炎慢性化和难以治愈的核心,也是此研究领域内的重点。从细胞样品中稳定抽提获取cccDNA对于保证cccDNA检测的准确性至关重要。Hirt法是一种抽提真核细胞染色体外DNA的方法,被用于HBV cccDNA的抽提,但存在操作复杂和耗时长等问题。为简化操作,有研究对Hirt法进行改良,结合硅胶膜离心柱来抽提染色体外DNA,但尚不清楚该法用于HBV cccDNA抽提与传统Hirt法的效果差异。本研究基于HBV cccDNA细胞转染系统、HBV复制细胞系及感染系统,以DNA印迹(Southern blot)和定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)作为检测评价手段,平行比较了传统Hirt-酚/氯仿法与改良Hirt-过柱法抽提HBV cccDNA的效果。结果表明,两种方法具有相当的抽提效率和抽提特异性,而改良Hirt-过柱法耗时更短,提示在进行细胞HBV cccDNA抽提时可选择改良Hirt-过柱法以提高实验效率。; 胡孔颖金宇焘叶建宇宰文静王洋李雨檬陈捷亮; 关键词：乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA 抽提方法

一种利用数字PCR定量检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的方法: 本发明公开一种利用数字PCR(ddPCR)定量检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(cccDNA)的方法，采用T5核酸外切酶处理待测样本；设计特异性扩增cccDNA的引物对和探针，所述引物对序列如SEQ ID NO.:1和...; 胡源王卓陈彦猛

基于微滴数字PCR技术建立乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA检测方法: 背景和目的肝脏中共价闭合环状DNA(cccDNA)的存在是乙型肝炎病毒(HBV)持续感染的主要原因。cccDNA目前的检测方法存在灵敏度和特异性方面的不足,亟需建立一种便于操作同时兼具高灵敏和高特异性的cccDNA检测方...; 陈思思田原徐玲范子豪曹亚玲张向颖段钟平刘梅任锋; 关键词：乙型肝炎病毒 CCCDNA HBV PCR

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