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结核分枝杆菌分泌蛋白早期分泌性抗原6(ESAT-6)的免疫学性质及其在新型疫苗中作用的研究进展被引量:2
2024年
早期分泌性抗原6(ESAT-6)是结核分枝杆菌(MTB)关键的毒力因子,可通过抑制巨噬细胞的吞噬杀菌功能与自噬反应抵抗机体对MTB的清除,从而减弱机体对MTB感染的免疫防御功能。此外,ESAT-6诱导的巨噬细胞的凋亡与固有免疫细胞的大量坏死可促进MTB的扩散、定植,引发MTB的全身感染。ESAT-6还可抑制Th1细胞的保护性免疫反应从而抑制相关促炎细胞因子的分泌,引发机体免疫功能的紊乱,加速MTB感染进程。在这一感染过程中,ESAT-6所具备的高度免疫原性使其可作为优势抗原用于新型结核病(TB)疫苗的研制,具有广阔的发展前景。
李玉洁余海燕杨雨婷杨国平
重组幽门螺旋杆菌黏附素A的可溶性表达、纯化及其免疫学性质分析
2023年
目的 通过分子克隆、蛋白表达及纯化等技术获得重组幽门螺旋杆菌黏附素A(recombinant H.pylori adhesin A,rHpaA),免疫BALB/c小鼠,制备anti-HpaA多克隆抗体后,分析其抗体特异性。方法 利用Phyre2和DNAstar生物信息软件分析rHpaA的三维结构及抗原性质;通过PCR长片段DNA合成技术获得黏附素HpaA基因,插入质粒pCzn1中,制备重组质粒pCzn1-rHpaA,转化E.coli Arctic Express(DE3),经IPTG诱导表达、Ni-IDA亲和层析纯化后,获得rHpaA蛋白,Western blot鉴定其反应原性。将rHpaA辅以弗氏佐剂免疫雄性BALB/c小鼠,共6只,制备antiHpaA多克隆抗体,ELISA法鉴定其抗体特异性。结果 rHpaA具有较好的三维结构及抗原性质。双酶切鉴定及基因测序证明,重组质粒pCzn1-rHpaA含有完全正确的HpaA基因序列。重组菌株pCzn1-rHpaA/Arctic Express可溶性表达目的蛋白rHpaA,约占上清总蛋白的68.3%,纯度达98.1%。rHpaA可与anti-His和anti-H.pylori抗体相结合;antiHpaA多克隆抗体可特异性识别rHpaA和H.pylori裂解物。结论 经低温诱导表达和蛋白纯化等技术,可获得高纯度目的蛋白rHpaA,制备的anti-HpaA多克隆抗体具有良好的特异性,为研究H.pylori相关诊断试剂奠定了实验基础。
刘昆梅张富蕊李欣张国林刘宏鹏郭乐
关键词:纯化多克隆抗体
幽门螺旋杆菌脂蛋白Lpp20重组抗原的可溶性表达及其免疫学性质分析
2022年
[目的]利用原核表达系统表达幽门螺旋杆菌脂蛋白Lpp20(rLpp20),分离纯化获得重组融合蛋白rLpp20,利用其制备抗rLpp20多克隆抗体,并分析其抗体的特异性。[方法]利用生物信息软件分析rLpp20的抗原结构;通过拼接引物PCR法,获得幽门螺旋杆菌Lpp20基因序列,将其插入到质粒pCzn1中,构建重组质粒pCzn1-rLpp20,转入大肠杆菌Arctic Express中;经IPTG诱导表达rLpp20后,超声波裂菌,用Ni-IDA柱亲和纯化获得目的蛋白rLpp20。然后,利用Western Blot鉴定rLpp20与anti-H.pylori和anti-His tag的免疫反应性;最后,脂蛋白重组抗原rLpp20与弗氏佐剂混合,免疫BALB/c小鼠,制备anti-Lpp20多克隆抗血清,利用ELISA鉴定anti-Lpp20的抗体特异性。[结果]利用生物信息软件证实rLpp20具有较好的抗原性;重组质粒pCZN1-rLpp20经双酶切和基因测序鉴定,证实rLpp20序列与理论值一致;基因工程菌株pCzn1-rLpp20/Arctic Express可以以可溶形式表达rLpp20,经Ni-IDA亲和层析柱纯化,纯度约达98.2%。Western Blot结果证实:重组抗原rLpp20可特异性与anti-H.pylori和anti-His tag结合。ELISA结果证实:所制备的anti-Lpp20抗血清具有良好的抗体特异性,可特异性识别rLpp20和H.pylori裂解物。[结论]利用E.coli Arctic Express实现了脂蛋白重组抗原rLpp20的可溶性表达,经Ni-IDA柱亲和纯化获得了高纯度rLpp20;脂蛋白重组抗原rLpp20具有良好的免疫反应性和特异性,为进一步研制幽门螺旋杆菌疫苗及相关诊断试剂盒奠定了良好的实验基础。
李元齐召雄张富蕊李欣张国林刘宏鹏郭乐刘昆梅
关键词:幽门螺旋杆菌多克隆抗体特异
类鼻疽菌Hcp1及外膜多糖的制备与免疫学性质研究
类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei)简称类鼻疽菌,属兼性胞内革兰氏阴性菌,主要存在于水源和土壤中,可通过多种途径(如呼吸道、消化道等)感染人和动物,引起一种称为类鼻疽(Melioido...
章美娟
关键词:免疫原性
文献传递
重组乳酸菌多价Hp表位疫苗LL-plSAM-WAE的构建及其免疫学性质研究
目的:本研究设计了一种M细胞靶向性的乳酸菌表面展示黏膜免疫投递系统LL-plSAM,利用LL-plSAM辅助幽门螺旋杆菌多价表位疫苗CWAE,制备出了一种表面展示有M细胞靶向性重组抗原SAM-WAE的重组乳酸菌LL-pl...
王淑娥
关键词:幽门螺旋杆菌免疫学M细胞
文献传递
类鼻疽杆菌Ⅵ型分泌系统蛋白Hcp1的重组表达及免疫学性质鉴定被引量:4
2020年
目的重组表达类鼻疽杆菌Ⅵ型分泌系统溶血素共调节蛋白1(hemolysin coregulated protein 1,Hcp1),并对其免疫学性质进行鉴定。方法利用DNA重组技术以pET-28a表达系统在E.coli BL21(DE3)中重组表达Hcp1;通过亲和层析制备高纯度Hcp1蛋白;采用腹腔注射免疫小鼠制备抗Hcp1血清,ELISA检测抗体滴度,免疫印迹及免疫荧光分析抗体的免疫反应性。结果成功获得纯度达95%的重组Hcp1蛋白,该蛋白免疫小鼠后获得的抗血清具有较好的特异性和较高的抗体滴度(1∶512000),表现出良好的免疫原性和免疫反应性。结论成功制备了具有生物活性的Hcp1重组蛋白及其抗血清。
章美娟胡治强夏瑀培袁思琪闫晶敏饶承龙李倩杨文波毛旭虎
甲型肝炎病毒的提取及免疫学性质分析被引量:3
2019年
目的建立甲型肝炎病毒(hepatitis A virus, HAV)的提取方法,了解和掌握HAV的免疫学性质。方法利用人胚肺二倍体细胞培养并收获HAV,用层析纯化等方法提取HAV,然后通过抗原检测、免疫电镜检查以及小鼠免疫试验对HAV的免疫学性质进行检测和分析。结果利用层析纯化等方法提取HAV,抗原回收率达84%以上,蛋白去除率达97%以上,电镜及免疫电镜检查可以观测到典型的HAV以及HAV+IgM抗原抗体免疫复合物和HAV+IgG抗原抗体免疫复合物,免疫小鼠抗体阳转率为100%。结论利用层析纯化等方法可以对HAV进行有效提取,提取的HAV具有良好的免疫反应性和免疫原性。
岳立广徐艳玲李磊张民王影夏青娟王艺博邵燕常万柳刘建华刘令九
关键词:甲型肝炎病毒层析纯化免疫电镜免疫学性质
幽门螺杆菌多价表位疫苗CWAE的表达及其免疫学性质的研究被引量:1
2019年
目的:利用生物信息软件评价幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)多价表位疫苗CWAE的抗原结构,经原核表达获得高纯度CWAE蛋白,进而鉴定多价表位疫苗CWAE的免疫学性质。方法:通过生物信息软件分析H. pylori多价表位疫苗CWAE的抗原结构;用人工合成的H. pylori多价表位肽融合基因WAE替换重组质粒pET28a-CUE中的UE基因,构建重组质粒pET28aCWAE。然后,将pET28a-CWAE转入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,并通过Ni-NTP镍离子亲和层析纯化抗原蛋白CWAE;利用GM1-ELISA鉴定CWAE中CTB组分的黏膜免疫佐剂活性。最后,通过ELISA和小鼠脾脏淋巴细胞增殖实验检测CWAE激发BALB/c小鼠产生抗H.pylori抗体体液免疫和淋巴细胞免疫应答的能力。结果:通过生物信息软件证实H. pylori多价表位疫苗CWAE具有科合理的结构;重组表达质粒pET28a-CWAE经PCR、双酶切和基因测序鉴定,融合基因CWAE与设计序列完全一致;重组基因工程菌株pET28a-CWAE/BL21(DE3)经IPTG诱导表达,抗原蛋白CWAE主要以包涵体形式存在,经Ni-NTP镍离子亲和层析纯化,纯度约达93. 2%;GM1-ELISA实验证实,CWAE中CTB组分依旧保持有较好的黏膜佐剂活性;ELISA结果证实CWAE能够激发BALB/c小鼠产生H. pylori特异性抗体,而小鼠脾脏淋巴细胞增殖实验进一步证实CWAE能够激发针对H. pylori多种致病因子的淋巴细胞免疫反应。结论:H. pylori多价表位疫苗CWAE具有科合理的抗原结构,经原核表达可获得高纯度抗原蛋白,能够激发BALB/c小鼠产生H. pylori特异性抗体体液免疫和淋巴细胞免疫应答。为研发防治H. pylori感染的多价表位疫苗奠定实验基础。
郭乐郭乐何萌张帆刘宏鹏刘宏鹏
关键词:幽门螺杆菌特异性抗体
以苯环为连接桥的肺炎多糖结合疫苗及其免疫学性质研究
肺炎链球菌是一种革兰氏阳性菌,能够引起高死亡率的侵袭性肺炎疾病。荚膜多糖是肺炎链球菌的主要致病成分,早期曾以荚膜多糖作为疫苗预防肺炎链球菌的感染。然而,荚膜多糖是一种T细胞非依赖抗原,免疫持续时间短,不能诱导免疫记忆,不...
卫东
关键词:苯环连接桥免疫学性质
文献传递
脂肪干细胞体外分离培养及免疫学性质
2017年
讨论脂肪干细胞体外分离培养及免疫学性质。方法:选取在整形外科实行抽脂的3例健康志愿的皮下脂肪组织以及外周血,使用Ⅰ型胶原酶将脂肪组织进行消化,得到脂肪干细胞。使用流式细胞手术检测脂肪干细胞的分化群的组织相容性的抗原以及表面抗原的表达的情况。将淋巴细胞以及异体的脂肪干细胞进行共同培养,观察脂肪干细胞是否能够刺激淋巴细胞增殖。结果:脂肪干细胞具有较强的体外增殖的能力,脂肪干细胞的表面CD44,CD29,CD90,组织相容性抗原Ⅰ呈现的阳性表达。组织相容性抗原Ⅱ以及CD31,CD34,CD45呈现阴性表达。没有发现脂肪干细胞刺激淋巴细胞增殖。结论:脂肪干细胞在培养中具有较弱的排斥反应,表示脂肪干细胞可能会成为细胞治疗中同种的异体细胞的来源。
陈梓淼张宝林
关键词:脂肪干细胞体外分离培养免疫学性质

相关作者

陈元鼎
作品数:59被引量:142H指数:8
供职机构:中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所
研究主题:轮状病毒 抗原表位 嵌合蛋白 人轮状病毒 免疫学性质
范耀春
作品数:45被引量:122H指数:7
供职机构:内蒙古自治区疾病预防控制中心
研究主题:轮状病毒 监测分析 疑似预防接种异常反应 人轮状病毒 免疫学
李传印
作品数:45被引量:106H指数:6
供职机构:中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所
研究主题:基因多态性 汉族 轮状病毒 宫颈癌 单核苷酸多态性
曹雪涛
作品数:1,011被引量:2,865H指数:24
供职机构:中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所
研究主题:肿瘤 树突状细胞 基因治疗 基因疗法 基因修饰
郭乐
作品数:73被引量:92H指数:6
供职机构:宁夏医科大学检验学院
研究主题:幽门螺旋杆菌 重组抗原 多表位 尿素酶 核心组件