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Cas9稳定表达肿瘤细胞株的建立及其基因编辑活性被引量:2
2017年
目的:建立多种Cas9蛋白稳定表达的肿瘤细胞株,验证细胞中Cas9的基因编辑活性,方便后续研究中目的基因的编辑。方法在15种来自不同组织的肿瘤细胞株中通过慢病毒感染pLv-EF1α-Cas9-Flag-Neo或pLv-EF1α-Cas9-Flag-Puro及克隆筛选的方式建立Cas9稳定表达的细胞株;在其中3个细胞株中瞬时转入靶向TSC22基因的向导RNA,挑选单克隆,通过基因组PCR、测序及Western blot检测Cas9蛋白的基因编辑活性。结果筛选得到了69Cas9稳定表达的肿瘤细胞株,瞬时转入向导RNA后成功造成了细胞中TSC22基因的大片段缺失。结论成功建立了69Cas9稳定表达的肿瘤细胞株,其中的Cas9蛋白具有基因编辑活性。这些细胞株在大规模药物筛选、新药作用靶点的筛选以及基因功能研究等方面有潜在应用价值。
卞晓翠杨振丽冯海凉赵晓梅顾蓓李姜孙昊刘玉琴
泛素样含PHD和环指域1沉默对肿瘤细胞株HO-8910和HO-8910 PM 生物学功能的影响被引量:1
2015年
目的 观察泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)沉默对肿瘤细胞HO-8910和HO-8910 PM的影响.方法 以卵巢癌细胞株HO-8910和HO-8910 PM为研究对象,采用RNA干扰(RNAi)技术下调UHRF1在上述细胞中的表达;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HO-8910和HO-8910 PM细胞转染前后UHRF1 mRNA的表达水平;Western blot检测UHRF1蛋白的表达水平;转染第4天,用流式细胞术检测两细胞转染前后的凋亡水平;转染后24、48、72、96、120 h,用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测UHRF1敲减前后两细胞增殖水平的变化.结果 RNAi技术敲减UHRF1在HO-8910和HO-8910 PM细胞中的表达后,实验组(kd组)中UHRF1 mRNA和蛋白的表达均低于阴性对照组(nc组)和空白组(bl组,P<0.01);流式细胞术结果显示,HO-8910细胞在kd、nc和bl组的凋亡率分别为(16.04±1.41)%、(8.43±0.94)%、(7.76±0.36)%,kd组细胞凋亡率高于nc组和bl组(P<0.01),nc组和bl组比较差异无统计学意义(P>0.05);HO-8910 PM细胞在kd、nc、bl组的凋亡率分别为(17.98±4.39)%、(8.92±2.39)%、(8.18±0.83)%,kd组细胞凋亡率高于nc组和bl组(P<0.05),nc组和bl组比较差异无统计学意义(P>0.05);CCK-8结果显示,HO-8910和HO-8910 PM细胞从转染后48 h开始,kd组细胞增殖率低于nc组和bl组,差异有统计学意义(P<0.01),而nc组和bl组细胞比较,细胞增殖率差异无统计学意义(P>0.05).结论 抑制UHRF1在卵巢癌细胞株HO-8910和HO-8910 PM的表达后,细胞的凋亡水平增高,增殖能力减弱.
邵丽佳沈利洪葛梦圆
关键词:RNA干扰
抗癌活性肽对肿瘤细胞株增殖的影响及其机理探讨被引量:2
2012年
目的:探讨由山羊内脏提取制备的抗癌活性肽(Anti-cancer active peptide,ACBP)对胃癌细胞株BGC-823、MGC-803、鼻咽癌细胞株CNE增殖的影响及作用机理。方法:应用MTT法和流式细胞术观察不同剂量ACBP在不同时间对体外培养的BGC-823、MGC-803及CNE细胞增殖的影响,并对细胞周期及凋亡进行了检测。结果:MTT结果显示ACBP对BGC-823、MGC-803及CNE的增殖有抑制作用且呈现剂量依赖效应,在ACBP 20ug/mL时,对三种细胞株的抑制率分别达到38.3%、29.79%和42.02%(P<0.01))。流式细胞术检测细胞周期结果显示,3种对照组细胞大部分处于G0/G1期和S期,培养24h后,S期细胞数开始减少,G0/G1期细胞数增加,48h和72h后呈现显著性变化(P<0.01)。流式细胞术检测细胞凋亡结果显示ACBP作用早期,凋亡细胞(AV+/PI-)增多,在48h和72h后更加明显。结论:ACBP对分化不同的胃癌细胞BGC-823、MGC-803及鼻咽癌CNE细胞的增殖有抑制作用,其作用机制可能为诱导细胞凋亡,抑制DNA合成。
崔宏伟苏依拉其木格苏秀兰
关键词:抗癌活性肽肿瘤细胞系细胞凋亡细胞周期流式细胞术
Cdc25c介导的G2/M期检查点调控对肿瘤细胞株A549低剂量辐射超敏感性的影响
目的:通过下调Cdc25c 蛋白的表达来调控细胞周期检查点,观察其对HRS/IRR的影响,探讨HRS/IRR 现象的发生机制。   方法:构建靶向Cdc25c基因的特异性干扰质粒pGCsi-RNA1~3,脂质体转染A...
崔莹珊
关键词:低剂量辐射
酪氨酸磷酸酶α在肿瘤细胞株中新信号途径
酪氨酸磷酸酶α(PTPα)是一种能催化底物蛋白酪氨酸残基脱磷酸从而调节细胞内的蛋白质磷酸化状态的酶,是一个能调控细胞内分子状态从而参与细胞信号转导的蛋白质分子。本项目拟研究PTPα在乳腺癌和白血病的某些细胞株中参与细胞信...
王家敏
关键词:人肿瘤细胞株信号通路分子作用
条斑紫菜多糖PY-D2对4种肿瘤细胞株生长的影响被引量:4
2007年
目的:研究条斑紫菜多糖体外抗肿瘤的生物学活性。方法:应用生化技术分离和纯化条斑紫菜多糖,获得条斑紫菜多糖的2个组分,分别为PY-D1和PY-D2;在体外培养条件下分别用不同浓度的条斑紫菜多糖PY-D2处理4种肿瘤细胞,通过MTT法观察条斑紫菜多糖PY-D2对4种肿瘤细胞生长的影响;采用流式细胞仪检测肿瘤细胞细胞周期变化。结果:条斑紫菜多糖PY-D2诱导HO-8910、MCF-7、K562和7721肿瘤细胞72h后,对其生长有明显的抑制作用,呈剂量依赖效应,500mg/LPY-D2的抑制率分别为21.2%、23.6%、19.8%和21%(P<0.001)。流式细胞仪检测表明PY-D2可以阻滞肿瘤细胞细胞周期于G0/G1期或G2/M期。结论:条斑紫菜多糖PY-D2具有抑制肿瘤细胞HO-8910、MCF-7、K562和7721生长的作用,其有关的分子生物学作用机理值得进一步研究。
张陆曦徐红丽周贇顾佳雯郭婷婷何培民
关键词:抗肿瘤流式细胞检测
OLFM4^(GW112/hGC-1)、GRIM19及PIN1基因在12种肿瘤细胞株中的表达分析被引量:5
2007年
目的检测OLFM4GW112/hGC-1、GRIM19及PIN1基因在12种肿瘤细胞株中的表达,并探讨与肿瘤细胞凋亡与周期的关系。方法利用RT-PCR半定量的方法检测GW112、GRIM19与PIN1三种基因在12种肿瘤细胞株中转录水平。结果RT-PCR结果显示:12种肿瘤细胞株中GW112、GRIM19与PIN1三种基因均有表达,未出现转录缺失。其中胃癌细胞SGC-7901与脑胶质瘤细胞CHG-5中的GW112表达明显强于GRIM19,而在其余十种细胞株中GW112表达却明显低于GRIM19。实验组细胞中,PIN1基因只在SGC-7901与CHG-5中表达较弱,其余表达均较强。结论GW112、GRIM19与PIN1在这些肿瘤细胞中的表达状况很可能与它们的周期调控和细胞凋亡有关,对三种基因的表达研究可进一步对分析三种基因的功能提供依据。
黄轶曾昭淳左渝萍张玥
关键词:PIN1肿瘤细胞株基因表达RT-PCR
18种肿瘤细胞株药物敏感性与基因表达的关系被引量:6
2006年
目的探讨18种肿瘤细胞对化疗药物的敏感性与基因表达的关系。方法采用MTT法检测细胞株对阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)和卡氮芥(BCNU)的敏感性。流式细胞术检测P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽-S-转移酶-π(GST-π)、肺耐药蛋白(LRP)、多药耐药相关蛋白(MRP)和甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)等耐药相关基因和Fas、bcl-2、p53和p16等凋亡调控基因的表达。结果不同细胞株对同一药物敏感性有较大差异。相关分析表明,细胞株对DDP的敏感性与p53表达呈负相关(P=0.041),对其余药物的敏感性与所检基因的表达水平无关(P>0.05)。结论细胞株对DDP的敏感性与p53表达有关。
宋现让魏玲王兴武郑燕柳永蕾
关键词:肿瘤细胞株化疗敏感性基因表达
条斑紫菜多糖对四种肿瘤细胞株生长的影响
目的:研究条斑紫菜多糖(Porphyra yezoensis polysaccharide,PY)体外抗肿瘤的生物学活性.方法:体外培养条件下用不同浓度的条斑紫菜酸性多糖(PYP)处理4种癌细胞,通过MTT法观察条斑紫菜...
郭婷婷徐红丽周贇张陆曦顾佳雯何培民
关键词:抗肿瘤MTT法
极大螺旋藻多糖对5种肿瘤细胞株生长的影响被引量:16
2003年
目的 :观察极大螺旋藻多糖对回盲肠癌HCT 8、神经胶质瘤U2 5 1、宫颈癌HeLa、肝癌SMMC772 1、肺癌A5 49细胞株生长的影响。方法 :体外培养条件下用不同浓度的极大螺旋藻胞内、胞外多糖处理这 5种癌细胞 ,同时处理正常胚肝LO 2细胞 ,并用SRB检测法测定。结果 :极大螺旋藻胞内、胞外多糖对离体培养的宫颈癌HeLa、肝癌SMMC772 1、肺癌A5 49等肿瘤细胞均有明显的生长抑制作用 ,并存在浓度剂量效应 ,高浓度抑制作用强 ;而对离体培养的正常胚肝LO 2细胞的生长影响较弱。结论 :极大螺旋藻多糖能选择性地识别并杀伤癌细胞 ,值得进一步研究。
朱劲华张威王敏张成武李朝军
关键词:极大螺旋藻多糖人肿瘤细胞株细胞生长免疫调节

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刘延成
作品数:197被引量:154H指数:8
供职机构:广西师范大学
研究主题:配位反应 极性溶剂 配体 氯化铜 氯仿
陈静波
作品数:59被引量:94H指数:6
供职机构:云南大学
研究主题:赤霉酸 酯类化合物 人肿瘤细胞株 立体选择性合成 Β-胡萝卜素
陈振锋
作品数:286被引量:445H指数:12
供职机构:广西师范大学
研究主题:配位反应 极性溶剂 配体 配合物 肿瘤细胞株
梁宏
作品数:475被引量:1,668H指数:24
供职机构:广西师范大学
研究主题:配体 配位反应 配合物 极性溶剂 肿瘤细胞株
张洪彬
作品数:156被引量:219H指数:9
供职机构:云南大学
研究主题:咪唑盐 化合物 细胞毒活性 赤霉素 赤霉酸