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熊果酸干预人牙周膜干细胞成骨分化的效应被引量：1: 2025年; 背景:熊果酸可促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞定向分化,但其对人牙周膜干细胞是否具有促成骨作用目前相关报道少见。目的:探讨熊果酸对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化能力的影响。方法:分离、培养人牙周膜干细胞,取第3代细胞,分别采用含不同浓度(0,1,2,4,6,8μmol/L)熊果酸的普通培养基干预,干预1,3,5,7 d后,采用CCK-8法检测细胞增殖,筛选适宜干预浓度。取第3代人牙周膜干细胞,分别用含0,1,2,4μmol/L熊果酸的成骨诱导液干预,干预7 d后,采用qRT-PCR法检测碱性磷酸酶、Runx2、骨钙素m RNA的表达,干预14 d后,茜素红染色观察矿化结节形成。取第3代人牙周膜干细胞,对照组加入成骨诱导液,熊果酸组、拮抗剂组分别加入含熊果酸(2μmol/L)、骨形态发生蛋白信号通路拮抗剂Noggin的成骨诱导液,熊果酸+拮抗剂组加入含熊果酸(2μmol/L)、骨形态发生蛋白信号通路抑制剂Noggin的成骨诱导液,培养7 d后,采用qRT-PCR和Western blot检测骨形态发生蛋白2、Smad1、骨桥蛋白、Runx2的m RNA及蛋白表达。结果与结论:(1)1,2,4μmol/L熊果酸可促进人牙周膜干细胞的增殖,6,8μmol/L熊果酸可抑制人牙周膜干细胞的增殖,后续实验选择1,2,4μmol/L熊果酸进行干预;(2)与0μmol/L相比,1,2,4μmol/L熊果酸可促进碱性磷酸酶、Runx2、骨钙素m RNA的表达以及矿化结节的形成(P<0.05),其中以2μmol/L熊果酸效果最显著;(3)与对照组比较,熊果酸组骨形态发生蛋白2、Smad1、骨桥蛋白、Runx2的mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05),拮抗剂组上述指标的mRNA及蛋白表达均降低(P<0.05);与熊果酸组比较,熊果酸+拮抗剂组上述指标的mRNA及蛋白表达均降低(P<0.05);(4)结果表明,熊果酸可通过激活骨形态发生蛋白信号通路促进人牙周膜干细胞的成骨分化。; 郑茜刘萍萍顾煜婕谢蕾; 关键词：人牙周膜干细胞熊果酸成骨骨钙素骨形态发生蛋白2

低氧增强人牙周膜干细胞干性促进骨再生的作用研究: 2025年; 目的:研究低氧培养环境下人牙周膜干细胞(hPDLSCs)干性特征的改变及其对体内外成骨分化的影响。方法:常氧和低氧环境下培养hPDLSCs,通过CCK-8和集落形成实验研究其增殖能力,β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况,实时荧光定量PCR和Western blot实验检测干性相关基因性别决定区Y框蛋白2(SOX2)、八聚体结合转录因子4(OCT4)和NANOG表达水平。收集两种培养环境下的hPDLSCs上清液作为条件培养基配制成骨诱导液,在常氧环境下对hPDLSCs进行成骨诱导,利用碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红染色及实时荧光定量PCR实验检测成骨相关基因Ⅰ型胶原(COL-1)、骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)、Runt相关转录因子2(RUNX2)表达研究hPDLSCs体外促成骨分化能力。将两种培养环境预处理的hPDLSCs细胞膜片植入大鼠颅骨临界骨缺损,8周后取材进行显微计算机断层扫描(micro-CT)、HE染色、Masson染色、免疫组化染色和荧光染料标记新骨实验,检测hPDLSCs体内促成骨分化能力。结果:低氧环境下,hPDLSCs增殖能力增强(P<0.05),衰老水平下降(P<0.05),SOX2、OCT4、NANOG基因和蛋白表达均增强(P<0.05)。低氧培养hPDLSCs条件培养基体外促进hPDLSCs成骨分化,ALP活性增高、钙结节形成增多(P<0.05),COL-1、OPN、OCN、RUNX2基因表达升高(P<0.05)。低氧培养hPDLSCs细胞膜片植入骨缺损区后,新骨形成增多,镜下新生骨发出荧光面积更大、强度更强,大鼠颅骨骨体积分数(BV/TV)明显升高(P<0.05),HE和Masson染色观察骨缺损边缘可见大量新生骨组织,周围可见骨细胞及大量的胶原纤维。免疫组化结果显示OPN、OCN蛋白表达增高(P<0.05)。结论:在低氧环境下,hPDLSCs的干性增强,低氧预处理的hPDLSCs体内外促进细胞成骨分化。; 马佳慧肖轶婧李梓睿陈旭徐艳; 关键词：人牙周膜干细胞低氧干性骨再生

FoxO1转录激活Beclin-1表达对人牙周膜干细胞成骨分化的调控: 2025年; 目的:探讨人牙周膜干细胞中转录因子叉头框O1(Forkhead box O1,FoxO1)对自噬相关蛋白Beclin-1的转录激活作用以及FoxO1对人牙周膜干细胞自噬、炎症和成骨分化的调控机制。方法:将人牙周膜干细胞分为对照组(人牙周膜干细胞于杜氏改良培养基(Dulbecco's Modified Eagle Medium,DMEM)中贴壁培养24h,更换新DMEM培养基培养1周)、成骨诱导组(人牙周膜干细胞于DMEM培养基中贴壁培养24h,更换含100nmoL/L地塞米松、10mmoL/Lβ-磷酸甘油钠、80 mg/L的维生素C的DMEM培养基培养1周)、空载体组(对人牙周膜干细胞转染空载体质粒(Empty Vector,EV)24h,更换新的DMEM培养基继续培养1周)和FoxO1过表达组(对人牙周膜干细胞转染过表达FoxO1重组质粒(FoxO1 Overexpression,FoxO1-OE)24h,更换新的DMEM培养基继续培养1周)。利用实时定量PCR(quantitative PCR,qPCR)法和Western blot法检测细胞裂解液中各组中FoxO1和Beclin-1表达。利用双荧光素酶实验验证FoxO1与Beclin-1启动子区域的结合。用酶联免疫吸附实验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)法检测各组培养物上清液中炎症因子(白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α))的水平。Western blot法检测各组中自噬标志蛋白p62、微管相关蛋白1轻链3I(Microtubule-associated protein 1 light chain 3-I,LC3-I)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(Microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)的表达。使用碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)染色和茜素红S染色法检测各组细胞的成骨分化和钙结节形成。利用免疫荧光化学法检测转录因子Runx2的表达。结果:与对照组比,成骨诱导组中FoxO1和Beclin-1的mRNA及蛋白水平上调(均P<0.05),EV组与FoxO1-OE组相比也显示出相同的趋势(均P<0.05)。在双荧光素酶实验中,FoxO1能够显著上调Beclin-1野生型的荧光素酶活力(P<0.05),但对Beclin-1突变�; 胡雅周捷宇徐惠霞; 关键词：BECLIN-1 人牙周膜干细胞成骨分化

淫羊藿苷预处理增强人牙周膜干细胞对M1型巨噬细胞的影响被引量：1: 2025年; 背景:人牙周膜干细胞对M1型巨噬细胞促炎功能有一定抑制作用,具有抗炎等药理活性的淫羊藿苷是否能增强人牙周膜干细胞对M1型巨噬细胞的抑制作用尚不明确。目的:探究淫羊藿苷预处理人牙周膜干细胞后对M1型巨噬细胞的影响。方法:分离培养原代人牙周膜干细胞,并进行鉴定。对THP-1细胞进行诱导,采用免疫荧光染色及PCR进行M1型巨噬细胞鉴定。用含浓度10^(-7),10^(-6),10^(-5),10^(-4)mol/L淫羊藿苷的α-MEM完全培养基培养人牙周膜干细胞1,3,5,7 d,采用CCK-8法筛选合适的淫羊藿苷浓度进行实验。将α-MEM完全培养基、未处理的人牙周膜干细胞α-MEM条件培养基及淫羊藿苷预处理24 h的人牙周膜干细胞α-MEM条件培养基与RPMI-1640完全培养基以1∶1的比例对M1型巨噬细胞进行条件培养,分别为对照组、未处理组及预处理组,24 h后RT-PCR法检测M1型巨噬细胞炎症因子的mRNA表达情况;ELISA法检测M1型巨噬细胞炎症因子的蛋白表达情况;Western blot检测M1/M2型巨噬细胞表面标记物及核转录因子κB通路相关蛋白的表达。结果与结论:(1)CCK-8检测结果显示,10^(-7),10^(-6),10^(-5),10^(-4)mol/L淫羊藿苷对人牙周膜干细胞均无细胞毒性,且从第5天起,各浓度都提高了细胞活力,促进细胞增殖,选择10^(-4)mol/L淫羊藿苷进行后续实验。(2)RT-PCR法及ELISA检测结果显示,与对照组相比,未处理组及预处理组均降低了M1型巨噬细胞白细胞介素1β、白细胞介素6及肿瘤坏死因子α的表达与分泌(P<0.05),且预处理组低于未处理组(P<0.05)。(3)Western blot检测结果显示,与未处理组相比,预处理组CD86的表达明显降低(P<0.05);与对照组相比,未处理组和预处理组M2型巨噬细胞表面标志物CD206的表达均升高(P<0.01),且预处理组明显高于未处理组(P<0.01);M1型巨噬细胞经24 h条件培养后,与对照组相比,核转录因子κB/P65的表达在未处理组和预处理组均�; 喻婷吕冬梅邓浩孙涛程钎; 关键词：人牙周膜干细胞淫羊藿苷表面标志物

成骨诱导人牙周膜干细胞来源外泌体促进炎症微环境下人牙周膜干细胞成骨分化: 2025年; 背景:成骨诱导间充质干细胞来源外泌体具有较强的成骨分化能力,但是在炎症微环境下对人牙周膜干细胞成骨分化的影响尚不明确。目的:探究成骨诱导人牙周膜干细胞来源外泌体在炎症微环境下对人牙周膜干细胞成骨分化的影响。方法:收集离体牙并分离培养人牙周膜干细胞,成骨诱导3 d后提取外泌体。将人牙周膜干细胞分为4组:对照组加入成骨诱导培养基,外泌体组加入含5μg/mL外泌体的成骨诱导培养基,炎症模型和炎症模型+外泌体组以1μg/mL脂多糖处理24 h构建细胞炎症微环境,炎症模型组在脂多糖处理后加入成骨诱导培养基,炎症模型+外泌体组在脂多糖处理后加入含5μg/mL外泌体的成骨诱导培养基。通过茜素红以及碱性磷酸酶染色法检测各组人牙周膜干细胞的成骨分化能力;实时荧光定量PCR与免疫印迹法检测各组人牙周膜干细胞中Runt相关转录因子2、骨桥蛋白、成骨细胞特异性转录因子Osterix(OSX)和wnt通路相关蛋白β-catenin的表达。结果与结论:(1)与对照组相比,炎症模型组碱性磷酸酶染色相对面积、矿化结节染色相对面积以及Runt相关转录因子2、骨桥蛋白、OSX的表达量显著降低(P <0.05);(2)与炎症模型组相比,炎症模型+外泌体组碱性磷酸酶染色相对面积、矿化结节染色相对面积以及Runt相关转录因子2、骨桥蛋白、OSX的表达显著升高(P <0.05);(3)与对照组相比,炎症模型组wnt通路相关蛋白β-catenin表达量显著增加(P <0.05);与炎症模型组相比,炎症模型+外泌体组β-catenin表达量显著降低(P <0.05)。结果表明,成骨诱导人牙周膜干细胞来源外泌体可促进炎症微环境下人牙周膜干细胞的成骨分化,其作用机制可能与wnt/β-catenin信号通路有关。; 艾克帕尔·艾尔肯陈晓涛陈晓涛; 关键词：人牙周膜干细胞外泌体成骨分化

PCL-PEG-HAAM复合支架的构建及其对人牙周膜干细胞增殖、黏附及成骨分化的影响: 2025年; 目的初步探究PCL-PEG-HAAM支架的制备方法,以及复合支架对人牙周膜干细胞(PDLSCs)增殖、黏附及成骨分化的影响。方法通过生物酶/化学/机械联合的方法对人羊膜(HAM)进行脱细胞制备人脱细胞羊膜(HAAM),采用0.1%明胶作为黏附介质将聚己内酯-聚乙二醇(PCL-PEG)与HAAM整合,构建PCL-PEG-HAAM复合支架,并通过扫描电镜观察其显微结构。酶消化法培养PDLSCs,流式细胞术及多向诱导分化(成骨、成脂、成软骨)对PDLSCs进行鉴定。实验分组:Control组、PCL-PEG组、HAAM组、PCL-PEG-HAAM组,选取第3代PDLSCs分别进行CCK-8实验、BCIP/NBT染色、茜素红染色以及WB检测成骨相关蛋白(RUNX2、ALP、COL1)的表达;此外,还将第3代PDLSCs负载于PCL-PEG、HAAM、PCL-PEG-HAAM进行细胞粘附实验,通过以上实验检测PDLSCs在各组支架上的生物学性能及成骨分化的能力。结果去除羊膜上皮细胞的HAAM完整保留了基底层和致密层,扫描电镜下见基底层表面完整无剥脱,致密层胶原纤维相互交织呈多孔蜘蛛网状结构;PCL-PEG-HAAM复合支架为双层膜结构,两者间可见明显交界线,HAAM与下方呈“渔网状”的PCL-PEG纳米纤维紧密连接。CCK-8结果显示第7天时PCL-PEG-HAAM组细胞增殖速率高于PCL-PEG组(P<0.05);PCL-PEG-HAAM组的细胞粘附率高于PCL-PEG组(P<0.05);BCIP/NBT染色和茜素红染色结果显示PCL-PEG、HAAM、PCL-PEG-HAAM支架均能促进PDLSCs的成骨分化,其中,PCL-PEG-HAAM组染色面积最深最广;WB结果显示PCL-PEG-HAAM组RUNX2、COL1、ALP成骨蛋白表达量显著高于Control组、PCL-PEG组(P<0.05)。结论PCL-PEG-HAAM复合支架促进了PDLSCs增殖、黏附及成骨分化,是一种具有开发潜力的口腔生物膜。; 王妮王茹楠陈广生程佳佳高丽; 关键词：引导骨组织再生引导组织再生牙周组织再生

黄芪甲苷Ⅳ对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化影响: 2024年; 目的:探讨黄芪甲苷Ⅳ(AS-Ⅳ)对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖和成骨分化的影响及作用机制。方法:刮取人的牙齿根中1/3的牙周膜,采用组织块法对hPDLSCs进行培养;流式细胞术鉴定hPDLSCs表面CD105、CD90、CD44、CD45和CD34表达;使用碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红(ARS)染色以及油红O染色,对细胞的多向分化能力(成骨和成脂分化)进行鉴定;hPDLSCs用不同浓度AS-Ⅳ(0、20、50、100、150μmol/L)处理,通过CCK-8法检测hPDLSCs增殖活性;各组hPDLSCs(0、20、50、100、150μmol/L AS-Ⅳ)共培养7、14 d,采用ALP染色和ALP活性检测及ARS染色检测不同浓度AS-Ⅳ对hPDLSCs成骨分化的影响;实验分为对照组和实验组(150μmol/L AS-Ⅳ),均用成骨诱导液培养14 d,通过qRT-PCR法检测ALP、Runt相关转录因子2(RUNX2)和骨钙素(OCN)的mRNA表达水平,Western blotting检测ALP、RUNX2、OCN和β-catenin蛋白表达水平。结果:hPDLSCs具备间充质干细胞特征,细胞表面标志物CD105、CD44和CD90均表现为阳性,而CD34、CD45显示为阴性;hPDLSCs可成骨分化和成脂分化,具有多向分化潜能;CKK-8实验显示,AS-Ⅳ促进hPDLSCs增殖(P<0.05);ALP染色和活性检测及ARS染色结果显示,AS-Ⅳ能促进人hPDLSCs的成骨分化;qRT-PCR和Western blotting结果显示,与对照组相比,AS-Ⅳ(150μmol/L)组ALP、RUNX2、OCN mRNA和蛋白相对表达量均升高(P<0.05~P<0.01),β-catenin蛋白表达降低(P<0.05)。结论:AS-Ⅳ能促进hPDLSCs成骨分化,其机制可能为通过抑制Wnt/β-catenin信号通路实现。; 刘樊朱永娜张晓东王敏吴越何泽禹刘茜; 关键词：人牙周膜干细胞 WNT/Β-CATENIN信号通路增殖

ADAM28 shRNA干扰载体对人牙周膜干细胞增殖、分化和凋亡的影响: 2024年; 目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)shRNA干扰载体对人牙周膜干细胞(HPDLSCs)增殖、分化和凋亡的影响及作用机制。方法:用ADAM28 shRNA干扰载体转染HPDLSCs 48 h后检测转染效率,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术(FCM)检测细胞周期。酶动力学法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,Western blot检测分化相关基因CAP、Pax9蛋白的表达。FCM测定HPDLSCs凋亡率,Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白的表达差异。用SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果:重组干扰载体PGPU6/GFP/Neo-ADAM28-shRNA可高效转染HPDLSCs,干扰载体组的细胞增殖活性显著下降,S期、G 2+M期的细胞比例和细胞增殖指数(PI=S+G 2M)明显降低,ALP值明显降低,CAP、Pax9蛋白的表达水平下降,凋亡率显著提高,Bcl-2、Bax蛋白的表达水平上调。结论:ADAM28 shRNA干扰载体抑制HPDLSCs的增殖、分化,诱导HPDLSCs凋亡。其机制可能是干扰载体抑制金属蛋白酶域和类解离素域的催化裂解和类EGF功能域的促细胞增殖作用,阻碍Notch信号传递并参与细胞凋亡负反馈调节机制。; 赵征李杰邱海燕; 关键词：人牙周膜干细胞增殖分化凋亡

阿魏酸对大鼠正畸牙移动及人牙周膜干细胞成骨分化的影响: 李钇霖

LncRNA MEG8靶向miR-203调控人牙周膜干细胞成骨分化的机制研究: 2024年; 目的:体外研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)MEG8调控人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)成骨分化能力并探究其调控机制。方法:体外分离、纯化培养hPDLSCs,q PCR检测hPDLSCs成骨诱导前后lnc RNA MEG8和成骨相关基因Runx2、Osx、Ocn、Opn的表达改变;通过MEG8过表达及sh RNA慢病毒转染hPDLSCs并鉴定转染效率;通过Western blot检测RUNX2、OSX、OCN、OPN的表达变化,茜素红染色法检测hPDLSCs成骨诱导后钙化结节的生成情况;借助生物信息学方法分析lnc RNA MEG8的候选靶基因,并通过双荧光素酶报告实验进一步验证潜在靶基因;通过共转染miR-203 mimics和lnc RNA MEG8过表达慢病毒,分析共转染后hPDLSCs成骨分化能力的变化。结果:Runx2、Osx、Ocn、Opn成骨基因及lnc RNA MEG8的表达在hPDLSCs成骨诱导后显著上调;敲降lnc RNA MEG8可抑制hPDLSCs成骨分化并下调RUNX2、OSX、OCN、OPN蛋白的表达,而在hPDLSCs中过表达lnc RNA MEG8,则结果相反;通过相关性分析发现miR-203与lnc RNA MEG8呈负相关;进一步通过生物信息学分析lnc RNA MEG8的潜在靶基因含有miR-203,双荧光素酶报告实验验证miR-203为MEG8的靶基因;共转染实验结果发现miR-203 mimics可逆转lnc RNA MEG8对hPDLSCs成骨分化的促进作用。结论:Lnc RNA MEG8可靶向调控miR-203促进hPDLSCs成骨分化能力,提示lnc RNA MEG8可作为牙周炎的潜在干预和治疗靶点。; 袁清敏付娟王美玲赵西博冯保静; 关键词：成骨分化

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